تحضيرعدة لقياس تركيز الكالسيوم في الدم بالطريقة اللونية

Abstract

الخلاصة تم تحضير عدة لقياس تركيز الكالسيوم في الدم بالطريقة اللونية .ويستند مبدأ التفاعل على إرتباط ايون الكالسيوم مع الصبغة اللونية (CPC ) ( O- cresolpthalein complexone ) مكوناُ مركب ملون يمكن قياسه في طول موجي 570 ƞm . ويمكن توضيح التفاعل بالمعادلة التالية : Ca2+ + CPC Caـ CPC وقد قام الفريق البحثي بمقارنة عمل العدة المحضرة في المركز مع عدة لشركة (RANDOX ) وعلى نماذج قياسية ومرضية . وكانت النتائج مطابقة .

Key words :Determination of Calcium in Blood, Calcium in Blood . المقدمة يعتبر الكالسيوم من أهم العناصر الموجبة ( cations ) في النماذج البايولوجية والانسجة الحية . حيث يدخل الكالسيوم كعنصر اساسي في العديد من الوظائف الحيوية في جسم الأنسان بما فيها إنقباض عضلة القلب . إن النسبة الطبيعية للكالسيوم في الدم هي 2.38 mmol / L اي 9.5 mg / dl. حيث أن 99% منه يتركز في العظام وماتبقى يتواجد في الدم .إن كالسيوم الدم يتوزع بعدة أشكال فمنها أيونات الكالسيوم الحرة أو أيونات الكالسيوم المرتبطة بالبروتينات كالالبومين كما يمكن أن ترتبط أيونات الكالسيوم بالايونات السالبة مثل ال bicarbonates ,lactate , و phosphate وغيرها . يتم تنظيم مستويات أيونات الكالسيوم في مصل الدم بواسطة ثلاث هرمونات والتي يتغير معدل إفرازها إعتماداُ على مستوى الكالسيوم . وتعتبر الغدة فوق الدرقية هي العضو المسؤول عن تنظيم مستويات الكالسيوم في الجسم,بمعنى حين تكون مستويات الكالسيوم منخفضة جداُ في الدم وهو مايدعى بـ (hypocalceamia) تقوم الغدة فوق الدرقية بإفراز هرمون ال (parathormone)والذي يقوم بتحرير الكالسيوم الى مجرى الدم . وبذلك يمكن تقسيم الحالات المصاحبة لتغير مستوى الكالسيوم في الدم الى : أولاُ ـ إنخفاض مستوى الكالسيوم في الدم hypocalcaemia : وذلك حين يكون مستوى الكالسيوم أقل من 2mmol /l أو 8mg /dl . ويعد انخفاض الكالسيوم كعارض من أعراض انخفاض هرمون الباراثورمون أو نقص فيتامينD أو بسبب الارتفاع غير الطبيعي في عنصر المغنيسيوم. ثانيا"ـ: ارتفاع مستوى الكالسيوم في الدم hypercalcaemia : وهو إضطراب ينتج عموما" من حالات الاورام الخبيثة أو حالات إرتفاع مستوى هرمون الباراثورمون (Hyperparathyroidism ) .

الجزء العملي أولا" ـ مبدأ التفاعل : يتفاعل أيون الكالسيوم مع كاشف cresolphthalein complexone )_(o في وسط قاعدي مكونا" معقدا" ذي لون بنفسجي . ثانيا" ـ المواد الكيمياوية المستخدمة في تركيب العدة : ـ -R1 – Buffer : 2- amino . 2- methyl – propan -1 – ol PH 10.7 (3.5mol\ L) -R2 – chromogen : - (o- cresolphthalein complexone ) 0.16 mmol\L 8-Hydroxyquinoline . 6.89 mmol\L Hydrochloric acid 60 mmol\L -R 3 ـ EDTA 150 mmol\L CAL ـ standard Calcium 10 mg\dl

ثالثا" ـ طريقة إجراء الفحص : ـ - تمزج كميات متساوية من محلولي البفر والمحلول الصبغي إعتمادا" على عدد النماذج المراد فحصها . تمزج وتترك في درجة حرارة الغرفة . -يجرى الفحص باستخدام جهاز spectrophotometer وبطول موجي570 m وبدرجة حرارة الغرفة . تؤخذ 3 أنابيب إختبار وتعلم كالاتي :ـ

Sample Standard Blank ـ ـ 25µl H2 O 25µl ـ ـ Sample 25µl ـ Standard 1ml 1ml 1 ml Reagent (R1+ R2 )

- تمزج المحاليل في كل انبوب وتترك في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح بين 5 الى 50 دقيقة ,ثم تقرأ إمتصاصية النماذج ( A sample ) والمحلول القياسي (A standard ) مقابل ( Reagent blank ) . - بعد قياس إمتصاصية النموذج تضاف قطرة من محلول R3 الى كل من إنبوبي ال (sample ) و (reagent blank ) , عندها وخلال عشرة ثواني سوف يتحول لون النموذج الى عديم اللون . نعيد قراءة إمتصاصية ال( sample blank ) و( reagent blank / EDTA )

فتكون المعادلة الحسابية كالآتي : ـ A sample =A sample-A sample\EDTA (corrected)

الحسابات Concentration of calcium mmol / L =(A sample/A standard)×Standard.mmol\L OR: Concentration of Calcium mg\dl =(A sample/A standard)×Standard.mg\dl

رابعا" ـ تحديد المنحنى القياسي Calibration Graph:ـ لغرض اجراء المنحنى القياسي تؤخذ تراكيز مختلفة من المحلول القياسي للكالسيوم .وذلك حسب الطريقة التالية: ـ يحضر محلول قياسي بتركيز 50 mg\dl ) ) ـ يخفف المحلول القياسي الى التراكيز التالية: 5 mg\dl, 7.5mg\dl, 10mg\dl, 12.5mg\dl)) ويمكن تحضير محاليل بتراكيز اخرى تقع ضمن هذه التراكيز لزيادة دقة الرسم البياني . ويجرى الفحص كما هو مبين في الجدول رقم (1): جدول رقم (1) QC T St 12.5 St 10 St 7.5 St 5 BLANK - - - - - 0.1 D.W(ml) - - 0.1 0.1 0.1 0.1 - Standard 0.1 0.1 - - - - - Sample QC (ml)

2

2 2 2 2 2 2 Color reagent (ml)

تمزج جيدا".. ويضاف (2 ml Buffer) الى كل انبوب اختبار وتمزج ..ثم تترك في درجة حرارة الغرفة(25-30 C°) لمدة 15 دقيقة .وتقرأ الامتصاصية لكل المحاليل ثم توضع في رسم بياني (شكل رقم 1). ويمكن وضع مثل هذا المنحنى القياسي عند تحضير العدة انياَ للتأكد من دقة النتائج . ثم أخذت 15 عينة مرضية وأجريت الفحوصات بإستخدام العدة المحضرة مختبريا والعدة الأجنبية لغرض المقارنة وقد كانت النتائج متقاربة كما هو مبين في الجدول رقم (2) :

جدول رقم (2) مقارنة بين العدة البحثية وعدة أجنبية عند قياس تركيز الكالسيوم في 15 عينة مرضية العدة الاجنبية العدة البحثية رقم النموذج Conc. of calcium mg/dl Absorbance of serum Conc. of calcium mg/dl Absorbance of serum 6.09 0.274 5.68 0.262 1 6.67 0.282 7.3 0.279 2 5.6 0.268 5.4 0.259 3 6.5 0.270 6.5 0.270 4 8.25 0.299 8.4 0.291 5 8.7 0.303 9.0 0.299 6 8.6 0.302 8.9 0.297 7 8.9 0.306 9.37 0.302 8 9.75 0.316 10.5 0.315 9 9.3 0.310 10.1 0.310 10 10.25 0.323 10.18 0.311 11 9.75 0.317 10.64 0.317 12 10.4 0.325 11.1 0.322 13 11.0 0.332 11.9 0.331 14 11.9 0.343 12.76 0.340 15

النـتـائج و المناقشة لقد أمكن تحضيرعدة محلية لقياس تركيز الكالسيوم في الدم , وقد أعطت هذه العدة نتائج مطابقة عند استخدام محاليل قياسية .وعند اجراء مقارنة بين العدة البحثية مع عدة اجنبيةعلى (15 ) عينة أخذت من أشخـاص مشـكوك بوجود خلل في تركيز الكالسيوم لديهم (جدول رقم 2), لوحظ أن الفرق في النتائج كان طفيفاَ جداَ بين قراءات العدتين,وعند تطبيق القراءات المختبرية على المنحنى القياسي كانت النتائج مقاربة للخط البياني , وبذلك يمكن التأكيد على إمكانية استخدام العدة المحضرة في مركزنا في قياس الكالسيوم وفي كافة المختبرات وبنفس كفاءة العدة الاجنبية .

المصادر Gitelman H.(1967) ,Anal .Biochemistry,20:521. Tietz text book of clinical chemistry and molecular Diagnostics , 4th ed . vol .4 p 1892-1904 . Wells R. Moorehead and Homer G.Biggs . clin.chem . 20 /11,1458-1460 (1974 ).