| الملخص | الخلاصـة
تعتبر بكتريا الـ Escherichia coli واحدة من أهم واخطر انواع البكتريا التي تعود الى العائلة المعوية .وهي سالبة لصبغة كرام ، عصوية الشكل ، متحركة ، وتعود اهميتها الى انتاجها كميات كبيرة من واحد أو أكثر من السموم التي تسبب تحطم شديد للأمعاء الدقيقة وهذه السموم هي ( Shiga – like Toxin,verotoxin ) .
ان هـذه البكتريــــا تسبب العـــديد من الامـــراض الخطيرة منها التهـــاب المجــــــاري البولية ( UTI ) Urinary Tract Infection ، مغص معــــوي دموي حاد (HC ) Hemorrhagic Colitis اسهال Diarrhea وقسم من سلالاتها E.Coli O157:H7 الخطرة جدا" تسبب الاسهال الدموي Hemorrhagic diarrhea لهذا تسمى هذه البكتريا بالـ Enterohemorrhagic Strain
تهدف هذه الدراسة تشخيص البكتريا وتنقيتها وزراعتها في اوساط زرعية خاصة ومن تم تحضير المستضد والضد ، ثم حقن المستضد بحيوانات تجارب ( ارانب) للحصول على الضد وهي طريقة بسيطة وسريعة للكشف عن هذه البكتريا .
المفتــاح :
Serodiagnosis of E.coli polyvalent antisera by agglutination test., Diagnostic of E.coli by agglutination test ,Identification of E.coli by agglutination test.
المقدمــة
تعتبر بكتريا Escherichia coli جنس تابع للعائلة المعوية Enterobacteriaceae من صفات هذه البكتريا هي سالبة لصبغة كرام ، لاهوائية ، اختيارية ، شكلها عصوي Rod shape ، متحركة ، لاتنمو فوق 44.5 C◦ ، تخمر اللاكتوز وهذه الصفة مهمة جدا" تميزها عن اثنين من أهم انواع العائلة المعوية Shigella and Salmonella , ان بكتريا E.coli تملك , O antigen O- antigen .H antigen يشير الى المستضد الجسمي Somatic antigen و H- antigen يشير الى المستضد السوطي.
تعتبر هذه البكتــريا من أخطر انـواع بكتريــــا القولــــــــون فهي تنتج سموم تسمى Shiga- like Toxin وتسبب العديد من الأمراض منها التهاب المجاري البولية (UTI) Urinary Tract Infection ، مغص معوي حاد والاسهال diarrhea وقسم من سلالاتها تسبب الاسهال الدموي Bloody diarrhea .
ان تلوث الماء واللحوم والخضروات والحليب غير المبستر هو سبب انتقال والاصابة بهذه البكتريا ومن اعراض الاصابة بهذه البكتريا هي : اسهال مائي watery diarrhea مغص بطني حاد abdominal cramps ، حمى قليلة او بدونها.
الجزء العملي :
زرع البكتريا :
- تم زرع البكتريا على الوسط الزرعي (EMB) Eosin – Methylene Blue لمعرفة قابليتها على تخمر اللاكتوز وكذلك على الوسط الزرع ماكونكي MacCokey Agar .
- تم اجراء الفحوصات البايوكيميائية للتأكد من هذه البكتريا .
تحضير المستضد :
- تنمى بكتريا الـ E.coli على وسط Soya Agar (TSA) Tryptic في حرارة 35C◦ لمدة 24-18 ساعة .
- تجمع الخلايا النامية بالاطباق باستخدام ( Phosphate Buffer Saline ) PBS
- ترسيب البكتريا بالطرد المركزي .
- تغسل البكتريا بالـ PBS .
- توضع في حمام مائي بدرجة 50 C ◦ مع التحريك .
تحضير الضد :
تم حقن الأرانب التي استعملت كحيوانات تجربة تحت الجلد من 4-6 جهات في ظهر الأرنب بعدها أعطيت الأرانب جرعة تقوية 4 مرات في 4 أسابيع . وبعد (10) أيام بعد آخر حقنة يتم سحب الدم من القلب مباشرة.
يوزع الدم مباشرة ( قبل تخثره ) في أنابيب طرد مركزي معقمة .
يترك الدم في الأنابيب لمدة (40-50) دقيقة ثم يطرد مركزيا" لفصل المصل الذي يظهر رائقا" فوق خثره الدم .
ان المصل المفصول خلال هــذه الخطوة يمثل المصل التشخيصي متعدد التكافؤ لبكترياE.coli
المناقشة و الاستنتاج
أظهرت نتائج زراعة بكتريا E.coli على الوسط الزرعي EMB قابليتها على تخمر اللاكتوز وعلى الماكونكي فكانت مستعمراتها وردية اللون وجافة .
ان المصل المحضر بهذه الطريقة يعطي نتيجة موجبة مع المستضد الذي هو عبارة عن بكتريا الـ E.coli وكانت النتيجة الموجبة تظهر خلال دقيقتين وبشكل تكتل واضح للعيان وهذا دليل على وجود هذه البكتريا .
اما النتيجة السالبة فكانت لا تظهر أي تكتل وهذا يعني عدم وجود بكتريا E.coli .
تم اختبار هذا المصل مع أنواع أخرى من البكتريا مثل السالمونيلا ، البروسيلا فكانت النتيجة عدم وجود تلازن او تكتل وهذا دليل على فعاليته .
ان المادة المنتجة عبارة عن مصل له نفس خصائص المصل الاعتيادي عدا انه يحوي أجسام مضادة وهو سائل رائق ، شاحب اللون ( بلون الماء تقريبا" ) عديم الرائحة ، حساس للحرارة وعليه يجب ان يحفظ بدرجة (صفر – 2 م◦) .
تعتبر بكتريا الـ E.coli من اخطر أنواع البكتريا القولون فهي تنتج سموم تسمى Shiga- Like Toxin وتسبب العديد من الأمراض منها التهاب المجاري البولية ، الإسهال ، وبعض سلالاتها تسبب الإسهال الدموي الحاد ، وكذلك تسبب مغص معوي حاد .
ان هذه البكتريا خطيرة في حال عدم تشخيصها بشكل صحيح فهنا تكمن أهمية هذه الدراسة حيث تم تشخيص هذه البكتريا بزراعتها على أوساط زرعية نقية وتحضير المستضد ثم حقنه بحيوانات التجربة ( الأرانب ) للحصول على الضد .
يعتبر هذا الفحص من الفحوصات السريعة والبسيطة والتأكيدية في نفس الوقت ففي هذا البحث لا يمكن اعتمادنا على الوسط الزرعي فقط لأنها طريقة بدائية .لذا نستعمل هذا الفحص فهو فحص حساس حيث يتم استخدام كميات قليلة من الضد أو المستضد لمعرفة النتيجة .
المصادر
1. Buchanan, R.L.and M.P. Doyle . 1977.Foodborne Disease Significance of Escherich O157:H7 and other Enterohemorrhagic E.Coli . Food Technology . 51:69-76 .Retrieved 2009 , from http:// members.ift /NR/rdonlyres/ DEF46711-6F29-4F1F-BDE2-04EED54967D6/O/ecoli.pdf.
2. Radu,S.G.Rusul.O.W. Ling, E. Purwati ,M .Mustakim , and S. Lihan .2000 Rapid and detection of Escherichia coli O157:H7 by Use of Rainbow Agar 0157 and PCR Ass southeat Asian J. Trop.Med .Public Health . 31 :77-79 Retrieved April 8, 2009 from http://www.tm.mahidol .ac.th/seameo/2000_31_1/15-2442. pdf.
3. The Merck Manuals Online Medical Library. 2009. Escherichia coli Infections. Retri 12,2009, from http: // www.merck. com/mmpe /sec14 /ch173/ch173f.html. | en_US |
