تحضير عدة الكشف عن الاصابة بداء المقوسات بأستخدام حبيبات اللاتكس

Abstract

الخلاصـــة تم تحضير عدة تستخدم للكشف عن الاصابة بداء المقوسات Toxoplasmosis مختبريا" بأستخدام حبيبات اللاتكس المغطاة بمستضد التوكسوبلازما السائل soluble antigen of Toxoplasma gondii تستخدم العدة بأخذ نموذج من مصل الشخص المشكوك بأصابته بهذا المرض ويضاف له الكاشف (latex) حيث يلاحظ حصول تلازن agglutination بين حبيبات اللاتكس ونموذج المصل في الحالات الموجبة ولايظهر التلازن في الحالات السالبة ، وتظهر نتيجة الفحص خلال 3-5 دقائق .

Key words : Toxoplasmosis , T.gondii , serodignosis Toxoplasmosis

المقــدمــــة يعتبر داء المقوسات Toxoplasmosis من الامراض الطفيلية المشتركة الشائعة التي يصاب بها الانسان والحيوانات ، اكتشف المرض عام 1908 من قبل العالم نيكول وتكون الاصابة مزمنة حيث تبدأ الاعراض مشابهه لاعراض الانفلونزا سرعان ماتختفي ويصيب الطفيلي اعضاء مثل الكبد والطحال والعقد اللمفاوية والعضلات الهيكلية والعيون ...واخطر طرق انتقال المرض عن طريق المشيمة placenta في النساء الحوامل الى الاجنة حيث يسبب الاجهاض في الاشهر الاولى للحمل اويسبب ولادة اجنة مشوهة مثل استسقاء الدماغ hydrocephalus او العمى او موت الجنين. يسبب المرض طفيلي يدعى Toxoplasma gondii من صنف البوغيات اي يتكاثر بالابواغ ويتميز بقدرته على الحركة السريعة واختراق اعضاء الجسم من الانسجة المختلفة والتكاثر فيها . تعتبر الحيوانات الاليفة والبرية مثل القطط والخنازير والعصافير الخزان الرئيسي لانتقال العدوى. يحدث تكاثر الطفيلي في القطط لذلك سمي داء القطط وينتقل عبر تلوث الطعام ببراز القطط المصابة لذا يلاحظ ان اكثر نسبة من الاصابة تكون للاشخاص الذين يربون القطط في المنازل،او يتم تناول اعشاب ملوثة بالبراز من قبل الاغنام حيث ينتقل الطفيلي ويستقر في العضلات الهيكلية وتحدث اصابة الانســـــان عند اكله لحوم نيئة، او يتـــم انتقــــال البيـــوض ( الابواغ ) الى الفئران التي يتم اكلها من قبل القطط وعندها تكتمل دورة حياة الطفيلي .تصل نسبة حدوث المرض الى 13% في انحاء العالم. يتم الكشف عن المرض من خلال الاعراض السريرية اضافة الى الفحوصات السيرولوجية مثل طريقة التلازن الدموي غير المباشر indirect hemagglutinationاو طريقة التألق المناعي غير المباشر Indirect fluorescent antibody tech. ، تقنية التفاعل الانزيمي المناعي ELISA او بطريقة استخدام التلازن بحبيبات اللاتكسLatex agglutination test والطريقة الاخيرة تمتاز بسهولة اجراءها وعدم الحاجة الى اجهزة معقدة ورخص ثمنها وسرعة اجرائها (3-5) دقائق.

الجزء العملي تم الحصول على حبيبات اللاتكس حجم 0.4 تركيز 10% ومحلول حاوي على مستضد التوكسوبلازما السائل بأستخدام جهاز التكسير sonicator حيث تم تكسير الطفيلي وجعله بشكل سائل. حضر داريء الكلايسين بتركيز 0.054 M و0.27 M الذي استخدم في عمليات غسل حبيبات اللاتكس وتعليقها واختير افضل تركيز لها (800 مايكروليتر /20 مل من داريء الكلايسين 0.054M) واضيف لهذا المحلول مستضد التوكسوبلازما السائل (soluble antigen) وخلط جيدا" بأستخدام جهاز vortex وترك الى اليوم التالي، ثم رسب المحلول بأستخدام جهاز الطرد المركزي بسرعة 15000 دورة /دقيقة لمدة15 دقيقة واضيف الى الراسب داريء الكلايسين 0.27M الحاوي على 0.1% صوديوم ازيد والبومين المصل البقري وحفظ في الثلاجة لحين الاستخدام. حضرت نماذج السيطرة الموجبة +ve control من نماذج مصل لاشخاص مصابين تم التأكد منها بأستخدام عدد تشخيصية اجنبية وتم تعقيم النماذج بالترشيح واضيف لها المادة الحافظة ووضعت في عبوات زجاجية معقمه وحفظت في الثلاجة لحين الاستخدام.كما حضرت نماذج سيطرة سالبة ve control – من مصل حيواني خالي من الاصابة بالمرض ووضعت في عبوات زجاجية وحفظت في الثلاجة لحين الاستخدام. تحتوي العدة على كاشف اللاتكس 1.4 مل يكفي لاجراء 50 فحص .تم اختبار العدة على 50 نموذج لامصال اشخاص واثبتت العدة كفاءة ودقة في اظهار النتائج مقارنة مع عدد اجنبية معتمدة من قبل وزارة الصحة . وارسلت الى مركز المواد والعدد الطبية والمستحضرات الصيدلانية التابع لوزارة العلوم والتكنلوجيا واثبتت العدة صلاحيتها للاستخدام المختبري.

المنـــاقشــة والاستنتـــاج اظهرت النتائج المتحصلة كفاءة العدة في الكشف عن الاصابة بداء المقوسات مختبريا" مقارنة بعدد تشخيصية اجنبية ومن خلال البحث والنتائج تم تثبيت طريقة تحضير العدة واستخدام افضل التخافيف في تحضير مادة اللاتكس والمستضد كما بينت العدة ثباتيتها عند حفظها في درجة حرارة 2-8 م˚ خلال فترة انجاز البحث. عليه يمكن انتاج هذه العدة في مركز الرازي بالكميات المطلوبة لسد حاجة البلد منها والتي تقدرباكثر من 2000 عدة سنويا".

المصادر 1-Rayan KJ;Ray CG(editors)(2004).Sherris Medical Microbiology (4thed.).MCGraw Hill.pp.723-7 2- Tenter AM.Heckeroth AR,Weiss LM (2000) Toxoplasma gondii : from animals to humans'' Int J parasitil 30 ( 12-13 ) : 1217 – 58. 3- Alfonso Y et al .Molecular diagnosis of Toxoplasma gondii in cerebrospinal fluid from AIDS patient.Fluid resecearch.2009 .vol:6:2.