| الملخص | الخلاصة
تم تحضير عدة قياس الكرياتينين في الدم والتي تتكون من ثلاثة كواشف هي :
R1 ويتكون من Disodium phosphate مع Sodium hydroxide
R2 ويتكون من Sodium dodecyl-sulfate مع Picric acid
R3 ويتكون من محلول الكرياتينين القياسي و تم استخدام العدة للكشف عن الكرياتينين في مصل العينات المرضية بطريقة Jaffe اللونية المحورة . وتعتمد هذه الطريقة على تكوين معقد لوني (Creatinine - picrate complex) في وسط قاعدي و شدة اللون المتكون تدل على تركيز الكرياتينين في المصل و التي يتم قياسها بجهاز الامتصاص الضوئي على الطول ألموجي (510- 490) نانوميتر .
medium Alkaline
Creatinine + Picric acid Creatinine - picrate complex
Key word : creatinine , jaffe reaction .
المقدمـة
الكرياتينين (C4H7 N3O) هو منتج مشتق من فوسفات الكرياتين ( creatine phosphate ) و ينتج عادة بمعدل ثابت إلى حد كبير من قبل الجسم اعتمادا على كتلة العضلات , إذ يتم إنتاجه أثناء تقلص العضلات ويستخلص أو يزال من الدم عن طريق ترشيحه من خلال كبيبات الكلية (glomeruli) ليفرز في الإدرار. وان تراكيز الكرياتينين تعتمد على معدل طرحه من قبل الكلية لذلك ففي أمراض الكلى ترتفع مستويات الكرياتينين بالدم.لا يعتمد طرح الكرياتينين في الأشخاص الأصحاء على الغذاء لذلك فهو ثابت نسبيا (1)
Creatine Kinase
Creatine + ATP Phosphocreatine + ADP
Creatinine P H2 O
ATP: ادينوسين ثلاثي الفوسفات.
ADP: ادينوسين ثنائي الفوسفات.
P : فوسفات.
لذا يعد قياس الكرياتينين في المصل المؤشر الأكثر استخداماً في اختبار وظيفة الكلية . فعند وجود ارتفاع في مستويات الكرياتينين بالدم يدل على خلل في أداء النيفرون (2) .القيم الطبيعية للكرياتينين 1.1- 0.6 ) ) mg/dL ما يعادل (97-53) µmol/L في النساء .أما في الرجال فتتراوح القيم ( 1.3 – 0.9 ) mg/dL ، ما يعادل (115-80) µmol/L .
وضعJaffe طريقة لقياس الكرياتنين منذ عام 1886 اعتمدت على تكوين لون احمر عند تفاعل الكرياتنين مع picrate في المحلول القاعدي وبقي تفاعل Jaffe هو الأساس في طرائق قياس الكرياتنين المختلفة .
الجزء العملي
تم اعتماد الطريقة اللونية لتفاعل Jaffe في تحضير العدة (3) , و تتكون العدة من الكواشف التالية :
• R1 محلولDisodium phosphate بتركيز6.4 mmol/L مع Sodium hydroxide بتركيز (150 mmol/L ) .
• R2 محلول Sodium dodecyl sulfate بتركيز 0.75 mmol/L مع Picric acid بتركيز4.0mmol و يضبط pH المحلول على 4 .
• R3 محلول قياس من Creatinineبتركيز µmol/L 177.
يتم تحضير ( working reagent ) آنيا" وذلك بمزج حجوم متساوية منR1 و R2.
طريقة القياس :
يستخدم جهاز قياس الامتصاص الضوئي عند الطول ألموجي 490 نانوميتر لقياس تركيز الكرياتينين باستخدام خلية قياسcuvette بقطر 1سم وبدرجة حرارة 25◦ م ويتم القياس ضد محلول الكفئ blank)) . و طريقة القياس تتم بأخذ ثلاثة أنابيب اختبار لمحلول الكفئ
( blank ) , وللمحلول القياسي (standard ) , وللنموذج (sample ) . و تتم اضافة المحاليل كما موضح بالجدول رقم (1)
جدول رقم (1) يبين طريقة إضافة المحاليل
Blank Standard Sample
Working reagent 1 ml 1 ml 1 ml
D.W 100µl -- --
Standard -- 100µl --
Sample -- -- 100µl
تمزج المحاليل جيدا" وبعد 30 ثانية تسجل الامتصاصية الأولى A1 عند الطول ألموجي490 نانوميتر وبعد مرور دقيقتين من القراءة الأولى تسجل الامتصاصية الثانية A2 .
الحسابات :
(A2-A1)sample X 2mg/dl
Concentration Of Creatinine (mg/dL) =
(A2-A1) standard
2 mg/dL : تركيز المحلول القياسي للكرياتينين
المناقشة و الاستنتاج
تم قياس تراكيز الكرياتينين في مصل النماذج المرضية المأخوذة من المختبرات و نماذج المتطوعين باستخدام العدة المصنعة المعتمدة على طريقة Jaffe اللونية المتضمنة تفاعل الكرياتينين مع alkaline picrate , ومقارنة نتائجها بالعدة المستوردة (Biolabo Reagents ) وكانت النتائج كما موضح في الجدول رقم (2).
جدول رقم (2) يبين تراكيز الكرياتنين في المصل مقدرة (mg/dL ) والمقاسة بعدة الرازي والعدة الأجنبية
ت عدة الرازي العدة المستوردة (Biolabo Reagents )
1 1.42 1.33
2 1.14 1.00
3 2.57 2.33
4 0.86 0.66
5 1.14 1.00
6 0.57 0.66
7 1.42 1.33
8 0.57 0.66
9 3.42 3.33
10 0.86 1.00
11 1.71 1.66
12 0.57 0.66
13 1.14 1.00
14 2.85 2.66
15 1.42 1.33
نلاحظ من النتائج أعلاه عدم وجود فروقات كبيرة بين قيم تراكيز الكرياتنين في العدتين كما نلاحظ إن تراكيز الكرياتنين ضمن حدود المعدلات الطبيعية التي تتراوح بين 1.1- 0.6)) mg/dL للنساء و(mg/dL (1.3 – 0.9 للرجال لمعظم العينات مع وجود وبعض العينات ضمن الحدود غير الطبيعية مما يدل على وجود حالة مرضية , إذ إن مستويات الكرياتينين في الجسم تكون ثابتة نسبياً و لا تتغير ما لم يحصل تلف مفاجئ في وظائف الكلى ، و هذه النتائج تتفق مع ما ذكره في Saira Javed et al. (4) . و كانت نتائج هذه الطريقة أدق و أكثر حساسية من الطريقة الأصلية لـ Jaffe لعدم تداخل بعض المواد مع الكرياتينين التي تؤدي إلى زيادة شدة اللون , اذ تم استخدام Sodium dodecyl sulfate لخفض التداخلات اللونية وازالتها .
المصادر
1. Delanghe J; De Slypere JP, DwBuyzere M, Robbrecwtj, Wieme R, Vermeulen A. Normal reference values for creatine, Creatinine, & Caruitine are Lower in Vegetarians. Clin. Chem. (1989) 35 (8): 1802-3 .
2. Gross JL , de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, Zelmanovitz. Diabetic nephropathy: diagnosis, prevention, & treatment (2005) 28 (1) : 164-76.
3. Saira J., Kausar A., Nighat B. , Protein Metabolites; (Creatinine & urea) Elimination through kidneys in Healthy females. 2004, Vol:11, No:01 | en_US |
