تحضير عدة قياس الحديد بالدم

Abstract

تم تحضير عدة قياس الحديد في الدم بالطريقة اللونية . وتتكون العدة من أربعة كواشف هي صبغة ((ferene والمادة المختزلة (Ascorbic acid ) والمحلول الدارئAcetate buffer) ) والمحلول القياسي للحديد . وتم استخدامها في الكشف عن الحديد فــي مصل العينات المرضية . وتعتمد الطريقة على مبدأ التفاعل الذي يحرر حديد المصل ( ايونات الحديديك ) من الترانسفرين بعملية الاختزال في الوسط ألحامضي وبإضافة صبغة ferene التي تتفاعل مع ايونات الحديدوز لتكون المعقد اللوني الأزرق الذي يمتص على الطول ألموجي(595) نانوميتر . وشدة اللون المتكون تتناسب طرديا" مع كمية الحديد الموجودة في المصل .

Transferrin ( Fe+++)2 Ascorbic Acid 2 Fe++ + Transferrin

Buffer Fe++ + 3Ferene ferrous ferene (blue complex)

نتائج فحص النماذج المرضية بالعدة التي تم تحضيرها كانت متطابقة مع نتائج الفحص بالعدة الأجنبية .

Key word : serum iron , ferene , anemia.

المقدمة إن الحديد أساسي لوجود اغلب الكائنات الحية ، إذ يدخل في الجسم في مختلف الإنزيمات المتضمنة عمليات الأكسدة كما يتوزع في أجزاء مختلفة من الجسم . إن قياس كمية الحديد في المصل تفيد في تشخيص وعلاج كثير من الأمراض إذ إن تركيز حديد المصل ينخفض في المرضى الذين يعانون من فقر الدم نتيجة عدم تناول الحديد بكميات كافية أو امتصاص الحديد غير الكافي ، وفي حالات الالتهابات الحادة ، التمنيع ، خلل في عضلة القلب. وينخفض حديد المصل بنسب متوسطة في حالات الأورام الخبيثة أو التهاب المفاصل الرثوي أما زيادة حديد المصل فتحدث نتيجة لتناول الفيتامينات والحديد ، التهاب الكبد الحاد ، التسمم الحاد بالرصاص في الأطفال وفي حالة أمراض الدم الوراثية (2،1) إن النسب الطبيعية للحديـد في الجسم هي (11.6- 30.4) µmol/L (65-170) µg/dl في الذكور و (809-30.4) µmol/L (50-170) µg/dl في الإناث . يتأثر تركيز الحديد بالظروف الفيزياوية والمرضية مثل :- diurnal variation , menstrual cycle , pregnancy, iron contamination of syringe , hepatitis , acute & chronic inflammation , iron deficiency , iron overload . ونظراً لأهمية فحص الحديد في المصل فقد هدف البحث إلى إنتاج عدة لقياس كمية الحديد في المصل بالطريقة اللونية باستخدام صبغة الـ ferene .

الجزء العملي تتكون العدة من المحاليل الأربعة المذكورة أدناه : 1. محلول الصبغة chromogen المتكون من صبغة ferene بتركيز(22.2 mmol/L) ويرمز له ب(R1) . 2. المادة المختزلة وهي Ascorbic acid بتركيز (1.3mol/L) . ويرمز له ب(R2 ). 3. المحلول الداريء (Acetate Buffer) بتركيز (0.087 mol/L) و (pH 4.65) ر ويرمز له ب (R3). 4. المحلول القياسي ( Standard ) للحديد المحضر بتركيز (35.8 µmol/L) ويرمز له ب(R4).

طريقة القياس : تم استخدام جهاز الطيف الضوئي على الطول ألموجي (610-590) نانوميتر ، وتم القياس بأخذ ثلاثة أنابيب اختبار لمحلول الكفئ (blank ) وللمحلول القياسي (Standard ) وللمصل (Sample) . كما موضح بالجدول رقم (1).

جدول رقم (1) يبين طريقة إضافة المحاليل Blank Standard Sample R3 buffer 1000 µl 1000 µl 1000 µl R2 reductant 50 µl 50 µl 50 µl D.W 250 µl - - R4 standard - 250 µl - Sample - - 250 µl Initial Absorbance R1 chromogen 50 µl 50 µl 50 µl

وتسجل قراءة الامتصاصية الأولية ضد محلول الكفئ عند الطول ألموجي 595 نانوميتر , ثم تضاف الصبغة وتمزج جيدا وتوضع في درجة حرارة 20-25°م لمدة (15 ) دقيقة ثم تسجل قراءة الامتصاصية النهائية الحسابات : ΔA= final Absorbance – Initial Absorbance

ΔA sample Concentration = x conc. of standard of lron(µg/dl) ΔA standard

المناقشة والاستنتاج تم قياس تراكيز الحديد بالطريقة اللونية في مصل لعدد من النماذج المرضية قيد الدراسة المأخوذة من المختبرات ونماذج المتطوعين باستخدام العدة المصنعة في مركزنا ومقارنة نتائجها بالعدة المستوردة (Randox ) وكانت النتائج كما موضح في الجدول رقم (2).

جدول رقم (2) يوضح قياس تراكيز الحديد في مصل عدد من النماذج المرضية بواسطة عدة مركز الرازي والعدة الاجنبية (g/dlµ)

التسلسل عدة الرازي العدة الأجنبية(Randox) 1 71 71 2 192 192 3 72 72 4 54 54 5 64 65 6 57 57 7 69 69 8 36 36 9 40 40 10 149 149 11 107 107 12 111 111 13 69 69 14 140 141 15 144 145 16 70 72

نلاحظ من النتائج اعلاه عدم وجود فروقات معنوية بين قيم تراكيز الحديد في العدتين كما نلاحظ ان تراكيز الحديد ضمن حدود المعدلات الطبيعية التي تتراوح بين (50 -170 ) g/dlµ لمعظم العينات وثلاث نماذج فقط من بين العينات كانت ضمن الحدود الغير طبيعية التي تراوحت قيمها بين(192 ,40,36) g/dlµ مما يدل على كفاءة الطريقة المستخدمة . ولدقة الفحص يجب تجنب استخدام عينات الدم المتحللة او التي تحوي موانع التخثر مثل EDTA وcitrat اوoxalate اذ من الممكن ان تعطي نتائج خاطئة نتيجة لتداخلها مع التفاعل وبالتالي تأثيرها على شدة لون المعقد المتكون من الصبغة والحديد وهذه تتفق مع ماذكره Tietz (3).

المصادر 1. Henry J.B. ,Clinical Diagnosis &Management by Laboratory Methods, 19th ed., W.B.Saunders, Philadelphia, (1991) P.166-168 .

2. Burtis, Carl A. ,Ashwood ,Edward R., Tietz Textbook of Clinical Chemistry ,Second Edition (1994) P. 2062.

3. Tietz,N.W;Textbook of Clinical Chemistry, W.B.Saunders CO. , Philadelphia (1986) P. 1570-1583.