تحضير عدة قياس النحاس بالدم

Abstract

الخلاصة يعد النحاس من المعادن المهمة في عملية التمثيل الغذائي إذ يسمح للعديد من الإنزيمات بأداء وظائفها بكفاءة وعلى النحو السليم .ويوجد النحاس بشكل قليل جدا في الجسم ويمثل المرتبة الثالثة بعد الحديد والزنك . في هذا البحث حضرت عدة تشخيصية للكشف عن نسبة النحاس بالدم بالطريقة اللونية إذ تتفاعل ايونات النحاس مع صبغة) Di-Br-PAESA (3,5- لتكوين معقد لوني ازرق كثافته اللونية تدل على تركيز النحاس الموجود بالعينة التي تقاس بجهاز الطيف الضوئي على الطول ألموجي (590-570) نانوميتر وقورنت نتائج العدة المحضرة للكشف عن تركيز النحاس باستخدام مستويات الكشف المنخفضة , المتوسطة والعالية القياسية من شركة (Randox) وكانت نتائج القياسات ضمن المدى المحدد لكل مستوى مما يدل على حساسية الفحص فضلا عن سهولته ,وقد قيمت العدة في مختبر الصحة العامة المركزي وكانت جيدة.

Key Word: copper, ceruloplasmin , copper deficiency, Wilson`s disease المقدمة يخزن النحاس في الكبد وتركيزه يكون اقل في المخ والقلب والكلى والعضلات . يوجد النحاس بالدم على شكل مركب يسمى سيروبلازمين Ceruloplasmin وهو مركب مسؤول عن تكوين البروتين الذي يقوم بحمل النحاس إلى الأنسجة التي تحتاج هذا المعدن كما يعمل كإنزيم مساعد في أكسدة المعادن وخاصة الحديد . يساعد النحاس الجسم في التخلص من الجزيئات الحرة الطليقة بواسطة إنزيم Super oxide dismutase (SOD) وهو الإنزيم الذي يشارك في تركيب الكولاجين والايلاستين . ويلعب النحاس دورا هاما في إنتاج الطاقة و في إفراز الغدة الدرقية لهرمون Thyroxin وضروري لتركيب الدهون الفوسفورية Phospholipids) )(1). إن معدن النحاس له دور فعال في كافة وظائف الجسم وان نقصه يؤدي إلى أعراض عديدة منها نقص الحديد , تمزق الأوعية الدموية , هشاشة العظام , فقدان صبغة الشعر والجلد , ضعف عام , صعوبة التنفس , عدم انتظام ضربات القلب , ضعف في وظيفة الغدة الدرقية . اما زيادة تركيزه في الجسم فقد ينجم عنها بعض الإعراض مثل آلام في البطن , غثيان, إسهال , قيء, ضمور في أنسجة الكبد. بما أن المعدلات الزائدة من النحاس تفرزها الصفراء فإن التسمم يحدث في الأشخاص الذين يعانون من إعراض بالكبد أو لديهم خلل في إفراز الصفراء , والتأثير السام لمعدلات النحاس العالية في الأنسجة تتضح مع مرض ويلسون (Wilson disease) . إن القيم الطبيعية للنحاس في الدم للرجال(140-80) mg/dL وللنساء من ((155-80 mg/dL وللأطفال أكثر من 10 سنوات mg/dL (150-30) ولحديثي الولادة (67-12) mg/dL. هناك اختبارات عديدة لقياس مستوى النحاس في الدم وكذلك في الجسم ومن ضمنها الطرق التي تستخدم طيف الامتصاص الذري وAAS و NAA و HPLC (3,2). وتعد الطريقة المستخدمة في هذا البحث من طرق القياسات المباشرة باستخدام جهاز الطيف الضوئي .

الجزء العملي اعتمدت الطريقة اللونية في قياس تركيز النحاس باستخدام جهاز الطيف الضوئي (Spectrophotometer) (4) , وتتضمن طريقة العمل تحضير المحاليل الآتية : • تحضير محلول من Acetate Buffer (R1) بدرجة حامضية 4.9 PH . • تحضير محلول 0.2 mol/L من صبغة (R2) (3,5- Di-Br-PAESA) 4(3,5-Dibromo-2-pyridylazo)-N-Ethyl-N-(3-sulphopropyl)aniline • تحضير المحلول القياسي (R3)Standard بإذابة 200 µg/dL من كبريتات النحاس • تحضير Working Reagent وذلك بأخذ حجوم متساوية من R1,R2 . طريقة القياس : استخدمت ثلاثة أنابيب اختبار نظيفة وجافة : الأنبوبة ((B لمحلول الكفئ , والأنبوبة (S) للمحلول القياسي , والأنبوبة (T) للعينة . إضيفت المحاليل كما موضح بالجدول رقم (1) .

جدول رقم (1): يبين طريقة إضافة المحاليل الى انابيب الاختبار REAGENT Blank ((B Standard (S) Sample (T) Working Reagent 1 ml 1 ml 1 ml Distilled water 66 µL Standard 66 µL Sample 66 µL

تمزج المحاليل وتترك لمدة 10 دقائق بدرجة حرارة 25° م وبعدها تقرأ امتصاصية الالوان لكل من العينة (A sample) والمحلول القياسي (A standard) ضد محلول الكفئ بجهاز قياس الامتصاص الضوئي عند الطول ألموجي 580 نانوميتر. الحسابات Conc. of copper(µg/dL)= (A sample/ A standard ) X 200 إذ إن تركيزالمحلول القياسي للنحاس =200 µg/dL

النتائج والمناقشة حضرت عدة قياس النحاس بالطريقة اللونية وقيست تراكيز النحاس باستخدام المستويات القياسية المنخفضة القيمة (L1)والمتوسطة (L2) والعالية (L3) الأجنبية المنشأ Randox) ) وكانت النتائج كما موضح في الجدول رقم (2) . جدول رقم (2): يوضح تراكيز النحاس التي قيست بالعدة المحضرة باستخدام مستويات الكشف المنخفضة L1)) والمتوسطة L2)) والعالية (L3) القياسية من شركة (Randox) L3 ( 139 -209 ) L2 ( 82.7 - 125 ) L1 ( 82.7 – 123 ) Levels (µg /dl ) 155.4 116.8 94.9 Conc. of copper (µg /dl ) 174.3 121.8 110.9 182.2 122.6 111.7 168.0 121.8 117.6 173.1 120.0 110.9 152.0 121.0 110.9 144.5 117.6 94.9 148.7 116.8 107.0 146.2 117.6 95.5 173.1 121.0 111.7 160.4 117.6 97.3 165.5 117.6 94.9 168.0 121.0 97.3 173.1 120.0 110.9 173.1 117.6 94.9

يلاحظ من الجدول رقم (2) إن نتائج قياس تراكيز النحاس بالعدة المحضرة باستخدام صبغة (3,5- Di-Br-PAESA) لم تتجاوز المدى المحدد لكل مستوى , اذ تراوحت قراءات تركيز النحاس بين94.9) - 117)µg/dl باستخدام المستويات المنخفضة القياسية (L1) التي يتراوح مداها (123-82.7) µg/dl , كما تراوحت قراءات تركيز النحاس بين 116.8) (122.6 - µg/dl باستخدام المستويات المتوسطة القياسية (L2) التي يتراوح مداها (125-82.7) µg/dl , كما تراوحت قراءات تركيز النحاس بين 144.5) -(182.2 µg/dl باستخدام المستويات العالية القياسية (L3) التي يتراوح مداها (209- 139) µg/dl ,مما يدل على تفاعل ايونات النحاس في المستويات الثلاثة قيد الدراسة مع صبغة (3,5- Di-Br-PAESA) قد أعطى معقد لوني ثابت ,كثافته اللونية تناسبت مع كمية النحاس الموجودة في المستويات المستخدمة وهذه النتائج تتفق مع ما ورد في (5,4).كما إن تراكيز النحاس لم تتجاوز المدى المحدد لكل مستوى , وهذا يدل على كفاءة الطريقة المستخدمة فضلا عن كونها لا تتطلب مستلزمات كثيرة وسهلة التعامل بها ومنخفضة الكلفة مقارنة بالطرق الأخرى مثل ,AAS ,NAA HPLC (6). المصادر 1. Uauy R., etal,(1998).Essentiality of copper in humans, Am. J. Clin. Nutr. 67 ; 925S-9S. 2. Carl A., & Burtis. (1994). Tietz text book of clinical chemistry, USA, , P.1274. 3. Paul D.,Eck C.,Larry D. , (2009) . Introduction to copper toxicity. The ECK Institute of Applied Nutrition and Bioenergetics, ltd. 4. Abe A., Yamashita S.,Noma A.,(1989). Clin. chem. 35(4):197, 552-554. 5. Fahad S., Imtiaz N., Umair S., Asif M.,(2012). Determination of Copper Concentration in Human Blood Serum by Using Flame Atomic Absorption Spectroscopy (FAAS).Inter.Conf. on Chem.Eng.and Pharma. Scie. 6. Jamaluddin M. and Zannat T.,(2012).A simple spectrophoto-metric method for determination of copper in some real, environmental , biological , food and soil samples using salicylaldehyde benzoyl hydrazone. Lab. of Anal. Chem. , Pak. J. Anal. Environ. Chem.Vol.13,No.1:22-35.