| الملخص | الخلاصة
حضرت عدة الكشف عن بروتين(سى) الفعال او التفاعلي ( C-Reactive protein) فى امصال الاشخاص المصابين ببعض الامراض او الالتهابات مثل التهاب الامعاء والتهاب المفاصل والروماتيزم وكذلك امراض القلب ومنها تلف الاوعية الدموية فى القلب وانسداد الشرايين إذ ترتفع مستوياته نتيجة هذه الامراض وغيرها.
وتحتوى العدة المحضرة على معلق من حبيبات البولى ستيرين (اللاتكس) poly styrene latex مغطاة بمضاد بروتين (سى) الفعال والناتج من حقن الاخير في الماعز Monoclonal anti hCRP –IgG ويسمى هذا المعلق CRP Latex Reagent وتتكون العدة ايضاً من المحلول القياسي الموجب CRP Positive Control والمحلول القياسي السالب CRP Negative Control .
إن مبدأ الفحص يعتمد على التفاعل Agglutination بين مضاد بروتين (سي) الفعال (التفاعلي) والمغطى لحبيبات اللاتكس Latex Bead of Poly styrene ذات قطر 0.36 مايكروميتر وبروتين (سي) الفعال ذي التركيز العالي الموجود في مصل المريض ويزداد التلازن بزيادة نسبة البروتين وبالعين المجردة .
Key word: CRP, LATEX
المقدمة
بروتين (سي) الفعال او التفاعلي هو بروتين موجود في الدم ترتفع مستوياته في حالة الالتهابات ولذا هو من بروتينات المرحلة الحادة من الالتهابات واكتشف من قبل تيليت وفرانسيس فى عام (1930) وبوصفه مادة في مصل المرضى الذين يعانون من الالتهابات الحادة ، في البداية كان يعتقد ان البروتين قد يكون افرازاً مرضياً لانه كان مرتفعاً في مصل الاشخاص المصابين بمجموعة متنوعة من الامراض بما فيه السرطان(1) ولكن اكتشاف التوليف الكبدي اثبت انه من البروتينات الاصلية ذات الوجود الطبيعي في الانسان.
يشار وراثياً الى ان جين البروتين المتفاعل موجود على الكروموسوم الاول وبروتين (سي) التفاعلي مكون من (224) حامض اميني وهو على شكل قرص حلقي من خمسة أجزاء وهو عضو في أسرة البنيتراكسينات الصغيرة (2).
ويستخدم بروتين (سي) التفاعلي كمؤشر او دليل لعدد من الامراض منها :
- امراض القلب والشرايين Cardio-vascular disease .
- الامراض السرطانية Carcinoma.
- التهاب المفاصل والروماتيزمRheumatoid diseases.
البروتين هو عضو في فئة متفاعلات المرحلة الحادة اذ ان مستوياته ترتفع بشكل دراماتيكي خلال عمليات الالتهابات التي تحدث في الجسم ، وترجع هذه الزيادة الى ارتفاع تركيز انترلوكين -6 في البلازما الذي ينتج غالباً من قبل البلعميات (3) .
الجزء العملي
1- المواد وطرق العمل Materials & Methods
• المواد Materials:
1-Polystyrene latex particles (0.36µm).
2-Monoclonal goat anti-human-CRP.
3-Glycin saline buffer PH8.2,0.5M.
4-Bovin serum albumin.
5-Sodium hydroxide.
6-Sodium azide.
طريقة العمل :
أ- تحضير محلول الدارىء (Glycin buffer0.5M)
ب- تغسل مادة اللاتكس (1)مل ذو قطر 0.36 مايكروميتر باضافة (50)مل من محلول دارىء الكلايسين وباستخدام جهاز الطرد المركزي المبرد وبسرعة (1500)دورة/دقيقة ولمدة 15-20دقيقة.
جـ- يعلق الراسب باضافة 20-25 مل من المحلول الدارىء للكلايسين ويضاف له مضاد بروتين (سي) الفعال Monoclonal Goat anti hCRP-IgG وبواقع (0.5)مل(Protein concentration <40mg/ml) ثم يخلط بجهاز Shaker ويترك بدرجة حرارة الغرفة.
د- يرسب المحلول بجهاز الطرد المركزي المبرد بسرعة ( 1500 )دورة / دقيقة لمدة (15-20) دقيقة بعدها نتخلص من الرائق ويضاف الراسب الى محلول الكلايسين الذي يحتوي على 0.1% من البومين المصل البقري ويحفظ في الثلاجة.
2- طريقة الفحص :
1- تحفظ المحاليل والنماذج المرضية والامصال في درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها .
2- توضع قطرة واحدة 50مايكروليترتقريباً من المصل الموجب للعدة في الحفرة الاولى لسلايد العدة ثم توضع قطرة واحدة (50) مايكروليتر تقريبا من المصل السالب للعدة في الحفرة الثانية ، توضع قطرة واحدة من مصل المريض (50)مايكروليتر غير المخفف في الحفرة الثالثة ، وتحدث هذه العملية باستخدام Serological micropipette.
3- يمزج محلول اللاتكس ((CRP-Latex Reagent وتضاف قطرة من هذا المحلول بواقع (50) مايكروليتر الى كل حفرة من سلايد العدة 1 ،2 ،3 .
4- تمزج المواد المذكورة بالفقرة (3) بواسطة Stirring Sticks لمدة دقيقتين وتقرأ تحت إضاءة جيدة.
5- في النتيجة الموجبة يظهر التفاعل محبب agglutination نتيجة التصاق الأضداد الموجودة أو المعلقة على سطح حبيبات اللاتكس مع بروتين( سي) الموجود في مصل المريض او مصل العدة الموجب.
6- في النتيجة السالبة يكون مستحلب اللاتكس صافي وخالي من التلازن أي التفاعل Agglutination.
النتائج Result:
اجري تقييم لعمل عدة محضرة في هذا المركز على (80 ) نموذج حصلنا عليها من المختبرات التعليمية لمدينة الطب منها (34) موجب أي اشخاص مصابين بامراض التهابية مثل التهاب الامعاء والمفاصل والروماتيزم وكذلك الذين يعانون من مشاكل في القلب و (46) نموذج سالب أي اشخاص اصحاء لايعانون من أي مرض وقورنت النتائج مع عدة اجنبية منتجة من قبل شركة Spinreact الاسبانية المستخدمة في مختبرات المستشفيات الحكومية والاهلية وكما في الجدول رقم (1) التالي :
جدول رقم (1)
يوضح النتائج التي حصلنا عليها باستعمال العدة المحلية و العدة الاجنبية
Spinreact AL-Razi
Total - + Total - +
34 0 34 34 0 34 CRP+
46 46 0 46 46 0 CRP-
80 46 34 80 46 34 Total
+ : حدوث تلازن Agglutination.
-:عدم حدوث تلازن Non-Agglutination.
المناقشة والاستنتاج
أظهرت النتائج حساسية عالية لعدة مركز الرازي مقارنة مع العدة الاجنبية ، وقد اجريت الفحوصات اسبوعياً ولمدة (16) اسبوع للتاكد من ثباتية نتائج العدة وكانت النتائج جيدة ولم يُلاحظ أيّة تغييرات في نتائج العدة أي بمعنى نتائج كاذبة False result مع الاخذ بنظر الاعتبار ان العدة تحفظ في ظروف مبردة في ثلاجة مناسبة دون ظروف التجميد ، أي ان الخزن الجيد من شروط ثباتية العدة.
References
1- Chetana Vashnavi :Immunological & infectious disease 1996;6:139-144.
2- Thompson D,Pepyes MB , Wood SP.(1999).The Physiological structure of human C-Reactive protein & its complex with Phosphocholine.Structure 7(2):169-77.
3- Yamammoto S.et al.Veterinary Immunology & Immunopathology 1993:36:257-264. | en_US |
