ِستخلاص ودراسة الفعالية المضادة لمكروبات زيت بذور نبات الكرفس

Abstract

الخلاصة :- لزيت بذور نبات الكرفس فعاليات حيوية مضادة للطفيليات والفيروسات وللأكسدة ,هدف البحث بيان فعاليته المضادة للمكروبات . أن النسبة المئوية للزيت الطيار الذي استخلصمن بذور الكرفس عند طورها أللبني - بطريقة المذيبات - هي ) % (2.28 واثبتت التحاليل المايكروبايولوجية ( microbiological analysis ) فعالية تثبيط جيدة جدا له ضد (Saccharomyces cerevisiae yeast ) ومتوسطة ضد ((Bacillus pumilus bacteria . شخصت مكونات كيميائية اساسية في الزيت آنفا مع تركيز كل منهما مثل Ascorbic acid ;Carotene ;] Limonene ( - selinene ); Butylphthalide ; Limonene ; D- carvone ; - myrcene and Riboflavin. [ مما ثبت انه صالح للإستخدام في إنتاج المستحضرات الصيدلانية المضادة للأمراض التي تسببها الفطريات والبكتريا فضلا عن المستحضرات المقوية العامة والمدررة و إدخاله في صناعة الصابون الطبي ومواد التجميل و العطور ------------------- المقدمة :- نبات الكرفسgraveolens L. (Fam. Apiaceae = Umbelliferae ) Apium من النباتات الطبية المهمة والمستخدمة في علاج الكثير من الامراض ، أختير في هذه الدراسة لوفرته وكثرة استخدامه في البيئة العراقية . بينت نتائج الابحاث على الحيوانات المختبرية ان بذور الكرفس تنفع في علاج ارتفاع الضغط ومانعة للسرطان ، وقد اثبتت نتائج الابحاث على الفئران ان لمستخلص بذور الكرفس قدرة على منع حدوث السرطان فيها ] لاسيما المركبات ( phthalides) التي تعطي صفة الرائحة المميزة للكرفس [ والتي تعمل على تحفيز انتاج انزيم Glutathione –s- transferase ) ) الذي يساعد في تحطيم العديد من المواد السامة في الجسم و يعالج حالات التهاب المفاصل والسرطان ، كما ان وجود حامض اللينولينك ، الامبليفيرون ، السايمين ، الابيول ، الليمونين في ثماره تجعلها مضادة للالتهابات الرثوية والروماتزم فضلا عن المحتوى العالي من الكالسيوم فيها الذي قد يساعد في استرخاء العضلات المتشنجة ومطهرا للقناة البولية اذ للمركبات (Isquercitin , Ampleferon Terpinen -4-01 , Lemonine , Guaiacol , Cymene ) خواصا مضادة للبكتريا ومدررة . ويعمل زيت الكرفس مهدئاً (( tranquilzer . وجد ان له فعاليات حيوية كثيرة منها فعاليته المضادة : النمو البكتيري من خلال احتوائه على ( phytoalexine ) التي تمنع نمو البكتريا ، البعوض من خلال تأثيره على الجهاز العصبي لها ، الطفيليات لاحتوائه على مركبات ( - pinen ) ، الفطريات لاحتوائه على ( psoraten , scopoletin ) , والفيروسات لاحتوائه على الفلافونيدات والكيومارينات والتانينات فضلا عن كونه مضاد أكسدة ويعالج تسرطن الكبد المستحث , تحوي بذور الكرفس على (1.5-3) % زيوت طيارة . وجد ان من أهم المركبات الكيميائية في الزيت هي ( Selinene , Phathalide ) ومشتقاتهما إذ تعتبر المواد الفعالة التي تؤثر بايولوجيا على الأحياء المجهرية مثل البكتريا والفطريات وكبح الخلايا السرطانية [1[ ------------------------- الجزء العملي:- حصل على بذور الكرفس ( الحديثة الحصاد ) في الطور اللبني ( تكون البذور خضراء اللون والمجموع الخضري ذو لون اخضر ) من احد المزارعين في سامراء ، نقحت من الشوائب . اعتمدت طريقة المذيبات في استخلاص الزيت من البذور آنفا كما يأتي : 1- سحق g 100) ( من البذور آنفا ثم مررت على غربال sieve ] 0.5) mm ) , [ نقعت بالمذيب الطيار ( (petroleum ether) ,وضعت على هزاز مغناطيسيmagnetic stirrer) (, رشحت على ورق ترشيح whatman No.41) (. تخلص من المذيب بعملية التقطير تحت ضغط منخفض وعلى درجة حرارة C° ( 25 ) لمدة نصف ساعة بجهاز (Rotavapor ) . احتسبت كمية الزيت المستخلص و نسبته المئوية . جمع الزيت في قناني معتمة ومحكمة الغلق بعيدا عن الضوء والرطوبة وحفظ على درجة الانجماد . وفي طريقة الاستخلاص بالمذيبات العضوية آنفا كان الزيت العطري الطبيعي الناتج مطابقا تماما لحالته الموجودة عليها في أزهار النبات علما ان كلمة زيت طبيعي تعني في تجارة العطور زيت عطري لم يفصل بالتقطير . استخدمت طريقة (Disc diffusion agar ) ووسط زرع البكتريا ( media I) للتحقق من فعالية الزيت المستخلص ضد الأحياء المجهرية . 2 - شخصت المكونات الكيميائية الفعالة في زيت الكرفس بجهاز الاستشراب للسائل عالي الكفاءة . ووفق المعادلة التالية : Con.of sample / ml= والجدول رقم (1) يبين تشخيص وتركيز المكونات الفعالة في زيت بذور نبات الكرفس (mg/ml) جدول رقم (1) : تشخيص وتركيز المكونات الفعالة في زيت بذور نبات الكرفس (mg/ml) Concentration (mg/ml) Conc. of standard / ml Area of standard m2 Area of sample (extract) m2 Constituents No. 0.047 0.138 0.104 0.041 0.051 0.126 0.399 0.036 50 50 50 50 50 50 50 50 25624 25276 26672 21874 26563 42067 15150 34270 24470 69830 55765 18020 27452 106250 121000 24847 Ascorbic acid Carotene Limonene ( - selinene ) Butylphthalide Limonene D- carvone - myrcene Riboflavin 1- 2- 3- 4- 5- 6- 7- 8- ان البكتريا ( Bacillus pumilus) والفطر( Saccharomyces cerevisiae ) التي يعمل البحث عليها هي مشخصة من قبل المركز الوطني للرقابة الدوائية / وزارة الصحة , ومعتمدة لدى هذه الشركة في العمل المختبري . خزن الزيت المستخلص على درجة حرارة C̊ (30)وهي درجة حرارة الغرفة المثالية , وأيضاً خزنت عينة اخرى منه على درجة (40) C̊ وهي درجة حرارة عالية تخص الثباتية . حقنت العينات في الطبق وحضنت بدرجة (25) C̊ للبكتريا و (35) C̊ للفطر وذلك لمعرفة كفاءة التثبيط لهما . تبين أن معدل التثبيط ألمكروبي لفعالية الزيت المستخلص ضد البكتريا ( Bacillus pumilus ) هو (8) mm وكذلك للفطر (Saccharomyces cerevisiae) هو (14.5 ) mm. وأيضاً التأكيد على أن درجة التخزين المثالية للزيت المستخلص (30) C̊هي أفضل من الدرجة (40) C̊ حيث أعطى أفضل كفاءة تثبيط مكروبي . ----------------------------------- النتائج والمناقشة:- النسبة المئوية للزيت الطيار المحضر من بذور نبات الكرفس عند طوره اللبني بطريقة المذيبات هي (2.28%) وهي مطابقة للدراسات والبحوث المنشورة في هذا المجال حيث تراوحت كمية الزيت في البذور ( 1.5-3 % ) وهي أعلى من نسبتي الزيت المحضر بطريقة التقطير (1.86% , 1.2% ) التي حضرها (1) و(2) على التوالي وأهم المركبات الكيميائية في الزيت الطيار هي) Selinene ,Phthalide (ومشتقاتهما وقد ظهر المركب الأول في الجدول رقم (1) بالتسلسل ( 4 ) حيث تعتبر المواد الفعالة التي تؤثر بايولوجياً على الأحياء المجهرية مثل البكتريا والفطريات وكبح الخلايا السرطانية , وقد اختبر تأثير زيت الكرفس بايولوجياً واثبت التحاليل المايكروبايولوجية فعالية تثبيط جيدة جدا للزيت المستخلص ضد الخميرة (Saccharomyces cerevisiae) ومتوسطة ضد البكتريا) (Bacillus pumilus وضحت بالأرقام الآتية : ( 14.5) mm للخميرة ، (8) mm للبكتريا آنفا وضحت بالصورتين (2 , 1) . خصص وجود مكونات فعالة أساسية في الزيت المستخلص مع نسبة كل منهما mg/ml هي : Ascorbic acid , Carotene, Limonene ( - selinene) , Butylphthalide , Limonene , D- carvone , - myrcene and Riboflavin [. ]ولم تجر فعالية تثبيطية لعدد من السلالات القياسية (A.T.C.C) وذلك لأن بكتريا ) Bacillus pumilus (تعتبر قياسية لكل أنواع البكتريا وكذلك الخميرة ( Saccharomyces cerevisiae) قياسية للفطريات كافة )