| الملخص | الخلاصة
يهدف البحث إستخلاص نبات السواك (SalvadoraPersica L.) وهو قطعة خشبية من جذور شجر الأراك الذي ينتمي إلى العائلة (Salvadoraceae) باستخدام التقنيات التقليدية {الاستخلاص الترجيعي المستمر(Soxhlet) والاستخلاص بالنقع (Maceration) بإستخدام جهاز الهزاز (Shaker)} للحصول على مستخلصات مائية وكحولية ، ودراسة تأثير كل منهم على البكتريا المسببة لتسوس الاسنان والتهاب اللثة (Streptococcus mutans) بتراكيز مختلفة وبثلاث مكررات إضافة إلى أنواع أخرى من البكتريا {Escerichia coli, Staphyllococcusauerus, Pseudomonas aeuroginosa} ومقارنتها بالمضاد الحيوي (Gentamycin) كسيطرة، حيث اظهرت نتائج اختبارات الكشف عن الفعالية المضادة للاحياء المجهرية التي تضمنت البكتريا المذكورة آنفا، ان هناك تشابه بين المستخلص المائي و(السيطرة) في تثبيط بكتريا (Streptococcus mutans) عند التركيز (25 %) في حين كان المستخلص المائي اعلى عند التركيز (50 %) ، إضافة للمستخلصات الكحولية (الايثانول والميثانول) التي كانت أكثر بكثير من (السيطرة).
كُشف كيميائيا عن بعض المكونات الكيميائية (المجاميع الفعالة) للمستخلصات (المائي ، الكحولي) وتبين ان المستخلص المائي يحوي على عفصيات ، كاربوهيدرات ، كلايكوسيدات ، راتنجات ، فلافونيدات ، صابونين وقلويدات. في حين لوحظ أختفاء مجاميع الفلافونويدات والصابونين من المستخلص الكحولي .
أجري فحص السمية للمستخلص المائي لنبات السواك وبعدة تراكيز على الحيوانات المختبرية المكونة من ثلاث مجاميع وكل مجموعة تحوي (3) فئران وبواقع أربع مكررات وتبين خلوها من السمية.
الكلمات المفتاحية :- SalvadoraPersica L., إستخلاص , نبات السواك , السمية .
المقدمــــة
منذ العصور الأولى للإسلام والمسواك يستعمل لنظافة الاسنان ولطهارة الفم لإكسابه رائحة منعشة. قال رسول الله (صلى الله عليه وسلم) "لولا أن أشق على أمتي لأمرتهم بالسواك مع كل صلاة".
الأراك هو ما يعرف بالسواك (Tooth Brush Tree SalvadoraPersica)[1]، تتبع الفصيلة الأراكية (Salvadoraceae) ، ونبات الأراك عبارة عن شجرة معمرة ذات اغصان تتدلى عادة إلى الأسفل أو تكون زاحفة في بعض الاحيان، تنمو في الأماكن الحارة الاستوائية، فروعها شائكة وأوراقها بيضاوية ملساء متقابلة دائمة الخضرة، أزهارها صفراء مخضرة وثمرتها صغيرة في حجم حبة الحمص أو أكبر قليلا، يكون لونها أخضر أول الامر ثم تحمر وتسود وبها بذرة واحدة ، وتسمى ثمار الأراك بالكباث[2].
لنبات الأراك جذور طويلة تمتد عرضا تحت سطح الأرض، يؤخذ المسواك من جذور شجرة السواك ويقطع إلى اطوال مختلفة لاتزيد في الغالب عن (15 cm) ويكون اللون مائلا إلى الخضرة ثم يتحول إلى اللون البني الأسمر عند جفافه .
تغلف المسواك من الخارج طبقة فلينية تليها طبقة قشرية ثم تأتي بعد ذلك الألياف التي تكون ظاهرة بالمقطع العرضي له, وعند نقعه بالماء ودقه تتباعد الألياف وتتفرق وتتناثر. من بين تلك الألياف مادة هي عبارة عن الأشعة المخية التي تفصل الالياف عن بعضها البعض وتحوي حبيبات النشا وبلورات السيليكا التي ترى بالفحص المجهري لمقطع السواك. تتضمن التركيبة الكيمياوية لمادة السواك كل من مادة شبه قلويدية، ثلاثي مثيل أمين (Trimethylamine) ، نسبة عالية من الكلوريد والفلوريد والسليكا، الكبريت، فيتامين C، صابونين ، تانين، فلافونويد، بيتا سيستوستيرول (ß Sisto Sterol) [3] ، حمض اليانسون (m-anisic acid) و1,3-bis(3 methoxybenzyl)Urea.
ونظرا لأهمية نبات السواك (لما له من فوائد صحية للفم تفوق ما استحدث من ادوات وأدوية كيميائية) أستعمل في نظافة الفم والذي اخبرنا بإستعماله نبينا محمد (صلى الله عليه وسلم) الذي عاش في القرن السابع الميلادي، جاءت هذه الدراسة بهدف تحضير مستخلصات نبات السواك المائي والكحولي (الايثانولي ، الميثانولي) بالطرق التقليدية وتقييم الفعالية البايولوجية والمقارنة بينهم كأفضل تأثير على الاحياء المجهرية المسببه لتسوس الاسنان والتهاب اللثة.
الجزء العملي
-1 أشتري نبات السواك من المملكة العربية السعودية بشكل اعواد مجففة وطحن بواسطة الطاحونة الكهربائية للحصول على مسحوق ناعم منه.
2- تصنيف النبات:- صنف النبات من قبل الاستاذ الدكتور علي الموسوي, اذ ارسلت نماذج من النبات الى معشب كلية العلوم – قسم علوم الحياة/ جامعة بغداد وتبين انها ((SalvadoraPersica L..
3- تحضير المستخلصات النباتية:-
ا- المستخلص المائي (نقع):- وضع ( g50) من مسحوق نبات السـواك في دورق زجاجي مخروطي سعة (1 L) ، أضيف إليه (150 ml) ماء مقطر، وضع النموذج في جهاز (الحاضنة الهزازة ) بدرجة ( Cº37) لمدة (24 h) ، مررعلى عدة طبقات من قماش ناعم (الشاش الطبي) للتخلص من الشوائب الخشنة ، رشح المحلول بقمع بخنر، جفف الراشح بإستخدام جهاز (Spray dryer) بدرجة حرارةCº (4550 - ) ، جمع المتسخلص الجاف وحفظ في قنينة معتمة لحين الاستخدام ، الوزن الناتج (4.1 g).
ب- المستخلص الكحولي (نقع):- أخذت (100 g) من مسحوق نبات السواك ووضع في دورق زجاجي مخروطي سعة (1 L) ، اضيف إليه (350 ml) كحول الايثانول (80 %) ، وضع النموذج في جهاز(الحاضنة الهزازة) بدرجة ( Cº37) لمدة (24 h) ، مرر على عدة طبقات من قماش ناعم (الشاش الطبي) للتخلص من الشوائب الخشنة , رشح المحلول بقمع بخنر، وركز بواسطة جهاز المبخر الدوار(Rotary vacuum evaporator) ، جففت المادة المركزة في وعاء ستيل في الفرن الكهربائي تحت الضغط المخلخل (Oven under vacuum) بدرجة حرارة (40 Cº) ، جمع المتسخلص وهو بشكل سائل كثيف وحفظ في قنينة معتمة لحين الاستخدام ، الوزن الناتج (4.4 g) .
ج- المستخلص الكحولي (الإستخلاص الترجيعي المستمر):-بإستخدام (Soxholet)، أخذ (225 g) من مسحوق الســـواك، وضع في (Thumble) ووضع في الدورق (1 L) من كحول الإيثانول (80 %)، استمر الاستخلاص لمدة (6 h) عند درجة حرارة (60 Cº) ، ركز المحلول بواسطة جهاز المبخر الدوار (Rotary vacuum evaporator)، جففت المادة المركزة في وعاء ستيل في الفرن الكهربائي تحت الضغط المخلخل (Oven under vacuum) بدرجة حرارة (40 Cº) ، جمع المتسخلص الجاف وحفظ في قنينة معتمة لحين الاستخدام ، الوزن الناتج (5.2 g).
4- الكشف عن المكونات الفعالة :- أجريت مجموعة من الكشوفات النوعية للتعرف على المكونات الكيميائية في مستخلص نبات السواك للمستخلص المائي، الكحولي الذي حصل عليهم .
5- فحص الفعالية البايولوجية :- أستخدمت طريقة الانتشار بالحفر لاختبار فعالية المستخلصات, حيث نشطت الانواع البكتيرية في وسط (Nutrien Broth) لمدة (24 h) , اذ حُضِر( (250 mlمن الوسط المذكور بحسب تعليمات الشركة وعقم بجهاز المؤصدة (Autoclave) بدرجة حرارة (121 Cº) لمدة (15 min) وترك ليبرد بدرجة (25 Cº) ولُقح بـ (1 ml) مل من عالق الخلايا البكتيرية المذكورة مسبقا كل على حدة والذي مثل (1×10 8 cfu) اي ما يعادل (0.5 ماكفرلاند(, حُضر (250 ml) من وسط (Muller Hinton agar) حسب تعليمات الشركة وعقم بجهاز المؤصدة (Autoclave) وترك ليبرد بدرجة ((25 Cº ولقح بـ (1 ml) من عالق الخلايا البكتيرية , بعدها صب (20 ml) من الوسط لكل طبق زجاجي قياس (9 cm) , تركت الاطباق لتبرد وعملت عدد من الحفر لكل طبق بقطر (8 mm) لكل حفرة , واضيف (lµ 50) من المستخلص لكل حفرة باستخدام ماصة دقيقة عملت حفر لمقارنة المستخلصات بالمضادات الحيوية , إذ عملت ثلاث مكررات لكل طبق، حظنت الاطباق بدرجة حرارة (37 Cº) لمدة (24 h) في الحاضنة ، حددت فعالية كل مضاد بقياس قطر منطقة التثبيط .
6- فحص السمية (Toxicity test):- بإستخدام الحيوانات المختبرية (الفئران) وعلى ثلاث مجاميع, كل مجموعة تحوي على ثلاث فئران وبتراكيز مختلفة وبواقع ستة مكررات. أجريت التجربة في جامعة النهرين/ مركز بحوث التقنيات الاحيائية (البيت الحيواني) لفحص السمية للمستخلص المائي لنبات السواك وكانت كما يلــــي:- خضع المستخلص المائي الى ثلاثة تراكيز (10% , 20% , 40%) ، أعطي عن طريق الفم (تجريع فموي) ، والجرعة تتراوح مابين ml ( 0.1 – 0.2 ) مرتين في اليوم , تُركت الفئران لمدة (72 h) , أختبر المستخلص كونه سام أم غير سام .
المناقشــــة
الجدول رقم (1) يوضح نتائج الكشف الكيميائي (التقسيم الكيميائي) للمواد الفعالة في مستخلصات نبات السواك (SalvadoraPersica L. ) المائي ، الكحولي ، إذ يعتمد على مكونات الأيض الغذائي التي تتم بصورة طبيعية في خلايا وانسجة النباتات الطبية والعطرية والتي تسمى بالإفرازات الأولية أو المنتجات الطبيعية وتتميز هذه المركبات بالإختلاف الكيميائي لمجموعاتها الفعالة طبيا رغم إختلاف الأنواع بين النباتات المنتجة لهذه المواد الدوائية.
جدول رقم (1) الكشوفات النوعية الكيميائية لمستخلصات نبات السواك.
ت
نوع المستخلصات نوع الكشف
Tannins Carbohydrate Glycosides Phenols Resins Flavonoid's Saponin Alkaloid Protein Coumarins Terpenes Steroids
1 المستخلص المائي (طريقة النقع) + + + - + + + + - - - -
2 المستخلص الكحولي (Soxhlet) + + + - + - - + - - - -
حيث تمتاز الفلافونيدات كونها صبغات نباتية تذوب في الماء والتي يعزى لها معظم التأثيرات العلاجية للنباتات الطبية ، اذ تعمل كمضادات للاتهاب والهستامين والفيروسات وللاكسدة، والكلايكوسيدات مادة تساعد على الفتك بالجراثيم، أما الراتنجات فتمتلك صفة مطهرة ومقوية للثة، وللتنانيات دور فعال في علاج الجروح والحروق وتعمل مطهرات اذ تطهر اللثة والاسنان ولها استعمالات مشهورة ضد النزيف، كما انها مركبات مضادة للأكسدة وتمنع نمو الأحياء المجهرية ولها فائدة طبية في تكوين الأنسجة الجديدة وشفاء الأغشية المخاطية.
اظهرت نتائج فحص تأثير فعالية مستخلصات نبات السواك (المائي والكحولي) الخام المختلفة في الأنواع البكتيرية اختلافاً في معدلات أقطار مناطق التثبيط التي يكون لها علاقة مباشرة في حساسية كل نوع من البكتيريا, ونوع المذيب المستعمل الذي له أهمية في نوعية وكمية مركبات الأيض الثانوي الفعالة الموجودة في النبات الجاف، حيث استخدمت كل من {Escerichia coli, Staphyllococcusauerus, Pseudomonas aeuroginosa, Streptococcus mutans}، واستخدم النوع الأخير والخاص بالأسنان كونها الأساس في احداث التسوس من خلال عمليات معقدة ديناميكية بفعل هذا النوع من البكتريا والمسببه للويحة الاسنان التي تؤدي إلى تدمير تدريجي لمينا الاسنان وبدونها لا تتمكن باقي انواع البكتريا الخاصة بالفم من احداث التسوس والتهابات اللثة كونها تبنى عليها[4].لوحظ تفاوت في الفعالية بين المستخلصات بحسب نوع المذيب المستخدم، لما له أثر في استخلاص عدد معين من المركبات الفعالة حيويا والتي لها دور تثبيطي واضح ، من خلال نتائج الفعالية البايولوجية ضد البكتريا، ومقارنتها بالسيطرة (Gentamycin). ظهر تأثير المستخلص الايثانولي والميثانولي بشكل فعال لكل من بكتريا (Escerichia coli) السالبة لصبغة كرام و(Staphyllococcusauerus) الموجبة لصبغة كرام وبكتريا (Pseudomonas aeuroginosa) السالبة لصبغة كرام إذا ماقورنت بالمستخلص المائي الذي لم يعط أي فعالية. في حين اظهر الأخير فعالية جيدة عند استخدام تركيز (% 25) والذي يمثل ( g / ml0.25 ( منه على بكتريا (Streptococcus mutans) والذي يعتبر انسب تركيز ومقارب لفعالية (Gentamycin) يمثل ( g / mlµ 10) ، في حين أعطى كل من المستخلص الإيثانولي والميثانولي فعالية أكبر بكثير من السيطرة , كما في الجدول رقم (2)، شكل رقم (1) ، (2) ، (3).
جدول رقم(2) يوضح نتائج الفعالية البايولوجية لمتستخلصات نبات السواك.
Bacteria Inhibition Zone Diameter (mm)
Aqueous Extract Ethanolic Extract Methanolic Extract Positive Control (mg/ml)
(Gentamycin)
50%
25%
50%
25%
50%
25%
Escerichia. Coli - - 14 15 11 11 13
Staphyllococcusauerus - - 16 13 15 14 19
Pseudomonas aeuroginosa - - 13 13 11 11 13
Streptococcus mutans 27 22 32 28 31 29 22
P value 0.01
Mean of concentration 6.75 5.5 18.75 17.25 17 16.25
P value 0.00
يتضح من الجدول رقم (2) وجود فروق معنوية بين تراكيز المستخلص المائي والإيثانولي والميثانولي في قطر منطقة التثبيط حيث قيمة (P value) أقل من (0.05 %) , وحقق التركيز50 %) ) الذي يمثل (g / ml 0.5) للمستخلص الإيثانولي أعلى متوسط قطر تثبيط إذ بلغ (mm 18.75) قياسا بالتراكيز للمستخلصات الأخرى ، مخطط رقم (1) .
جدول رقم (3) يوضح نتائج فحص السمية للمستخلص المائي لنبات السواك.
ت عدد الفئران المكررات التركيز كمية المستخلص (ml) المدة الزمنية (hr) النتائج
1 3 4 % 10 ) 0.20.1 - ) 72 غير سام
2 3 4 % 20 ) 0.20.1 - ) 72 غير سام
3 3 4 % 40 ) 0.20.1 - ) 72 غير سام
الاستنتاجــــات
-1 تبين من خلال الكشوفات النوعية للمكونات الفعالة للمستخلصات (المائي, الكحولي) انها تتأثر بطبيعة المذيب من الناحية القطبية التي تؤثر في المجاميع المستخلصة وبطريقة الاستخلاص، حيث لكل مجموعة مواصفات وخصائص فعالية معينة.
2- اظهرت نتائج فحص السمية للمستخلص المائي والكحولي لنبات السواك أنه غير سام.
3- نتائج فحص الفعالية المضادة للبكتريا المسببه لتسوس الاسنان للمستخلص المائي الذي استخلص بطريقة (Maceration) ، تبين انها أنسب مثبط نظرا لتشابهها مع قطر التثبيط للسيطرة خاصة عند التركيز(% 25) الذي يمثل (g / ml 0.25) ، جدول رقم (2) وبالتالي تعتبر الأفضل كونها مجديه اقتصاديا.
التوصيـــــــــات
1- عمل دراسة لأنسب ظروف إستخلاص نبات السواك بالطرق الحديثة بإستخدام جهاز (Super Critical Fluid Extraction) ، التي لاتحتاج إلى مذيبات ومقارنتها مع المستخلصات بالطرق التقليدية وملاحظة مدى تأثيرها على نمو البكتريا المسببة لتسوس الاسنان والتهاب اللثة .
2- إجراء فحوصات بجهاز (GC-mass) للكشف عن مكونات المستخلصات الفعالة التي يحصل عليها بطرق الاستخلاص المختلفة والمقارنة بينهم .
المصـــادر
-1Arora, M., Gupta, V. K. (2011). PHYTOCHEMICAL AND BIOLOGICAL STUDIES ON SALVADORA PERSICA WALL: A REVIEW. Pharmacologyonline. V(1):(591-601).
2 - د. عبد الرحمن عقيل وزملاءه : النباتات السعودية المستعملة في الطب الشعبي، إدارة البحث العلمي ، مدينة الملك عبد العزيز للعلوم والتقنية. الرياض. (1987). ص(344).
-3 Gautam, G. K. Singh, C. S. Rasool, M. A., Sahu, D. C. (2013). A REVIEW ON INDIAN MEDICINAL PLANT "SALVADORA PERSICA". INTERNATIONAL J. OF UNIVERSAL PHARMACY AND BIO SCIENCES. 2(1): (308-316).
4- Al-Seabehawy, H. M. Z. (2014). The Effect of Glucosyltransferase Purified from Local Isolate Streptococcus mutans (Serotype C) on Egg YolK Antibodies (IgY) Generation in Layer Hens. Ph.D. Thesis. Engineering and Biotchnology Institute for Post Graduate Studies, University of Baghdad. | en_US |
