إستنباط وتحضير عدة تشخيصية لبكتريا الشيكلا الزحارية

Abstract

الخلاصة يهدف هذا البحث الى تشخيص البكتريا وتنقيتها وزراعتها في اوساط زرعية خاصة ومن ثم تحضير المستضد والضد, ثم حقن المستضد (البكتريا) بحيوانات تجارب (ارانب ) للحصول على الضد لتلك البكتريا ,وهي طريقة سريعة وبسيطة للكشف عن هذه البكتريا , فاذا كانت النتيجة موجبة فهذا يعني وجود البكتريا , اما النتيجة السالبة فتعني عدم وجودها . وعلى اساس هذه النتيجة يحدد المسبب المرضي لمرض الاسهال مثلا"وغيره من الامراض التي تسببها هذه البكتريا , وفي هذا البحث لايمكن الاعتماد على الاوساط الزرعية فقط لانها طريقة بدائية لذا يستعمل هذا الفحص (الذي يعتبرفحص حساس) اذ تستخدم كميات قليلة من الضد او المستضد لمعرفة النتيجة . ان المصلين المحضرين يعطي كل منهما نتيجة موجبة مع المستضد الخاص به والنتيجة الموجبة ظهرت خلال دقيقتين بشكل تكتل واضح للعيان (agglutination ) وهذا دليل على وجود البكتريا .اما النتيجة السالبة فلم تظهر اي تكتل وهذا يعني عدم وجود البكتريا . الكلمات المفتاحية : Shigella flexneri & Shigella dysenteriae polyvalent serotyping المقدمة تعتبر بكتريا شيكلا ( Shigella ) واحدة من اهم واخطر انواع البكتريا التي تعود الى العائلة المعوية ( Enterobacteriacea ) . وهي سالبة لصبغة كرام ,عصوية الشكل ،غير متحركة غير مخمرة للاكتوز. وتعود اهميتها الى انها تسبب تلف من خلال غزوها لبطانة القولون تنتقل هذه البكتريا عن طريق الماء والطعام الملوث او مراكز العناية اليومية او اثناء الترحال ]1[ .ان المسببات المختلفة لحالات التهاب الامعاء نالت اهتمام شديد لما تسببه من حالات مرضية مختلفة ياتي الاسهال في مقدمتها ,الذي يعد من المشاكل الصحية الخطيرة التي تواجه معظم دول العالم ، كما يعد من احد عوامل ارتفاع معدلات الوفيات بين الاطفال والرضع خاصة الدول النامية وبشكل خطير]2[ ، ولاهمية هذه البكتريا تعنى الشركات العالمية بانتاج عدد لتشخيص وتحديد النمط المصلي لها ليتسنى علاج الحالة المرضية بشكل افضل وتقليل نسبة الوفيات المتسببة بهذه البكتريا خاصة في حديثي الولادة ،مما دفع مركزنا لاستنباط عدة تشخيصية لهذه البكتريا التي تعنى بالتشخيص الدقيق للنمط المصلي لبكتريا الشيكلا التي تؤدي الى حدوث الاسهال الدموي الذي يسبب الوفاة في الاطفال دون سن الخامسة , كما تؤدي الى مضاعفات شديدة مثل تدلي المستقيم والاختلاجات العصبية , وان اصابة الاطفال حديثي الولادة بمثل هذه الحالات تكون اكثر تأثيرا" كون الجهاز المناعي غير كامل التكوين عند الولادة وله قابلية محدودة لتكوين الاجسام المناعية. ومن اعراض المرض حدوث اسهال حاد و دموي ,ألم ,تقلص البطن ,حدوث احساس بصعوبة التبرز ,ارتفاع درجة الحرارة تقيء وحدوث جفاف بسبب القيء والاسهال ]3[, وقد تصاحبها مضاعفات خارج الجهاز الهضمي ،اهمها تجرثم الدم ( ( bacteremia و متلازمة التحلل الدموي البولي ( Hemolytic uremic syndrome) تشنج , الاعتلال الدماغي والتهاب المفاصل التفاعلي .

الجزء العملي 1- المواد المستعملة : 1-1- اوساط زرعية مختلفة. 1-2- مواد كيمياوية . 2- طريقة العمل : 2-1- زرع البكتريا : زرعت البكتريا على الاوساط الزرعية (nutrient agar , nutrient broth) لتنشيطها وادامتها. 2-2- تحضير المستضد ( (Antigen : - نميت بكتريا الشيكلا على وسط ( nutrient agar) . - جمعت الخلايا النامية في الاطباق باستخدام PBS(Phosphate Buffer Saline) . - استخدم جهاز الطرد المركزي ( ( centrifuge لترسيب البكتريا . - غسلت البكتريا بمحلول دارئ الفوسفات PBS)) . ووضعت في حمام مائي بدرجة ) 50 م◦ ( لمدة (ساعتين) لقتل الخلايا البكتيرية. 2-3- تحضيرالضد (: (Antibody - حقنت الارانب ( التي استعملت حيوانات تجربة بالمستضد لكل من نوعي البكتريا المستخدمين في البحث ) تحت الجلد من (4-6 ) جهات في ظهر الارنب بعدها أعطيت الارانب جرعات تقوية (4) مرات في (4) أسابيع . - كان الحقن على شكل جرعات متدرجة تبدأ (1.0 مل( تحوي حوالي (5×510) بكتريا . وزيدت جرعة المستضد المحقونة بالتدريج لتصل الى )0.5 مل( بعدد حيوي تقارب (30×310) بكتريا. - بعد (10) أيام من أخر حقنة سحب الدم من القلب مباشرة. - وزع الدم مباشرة (قبل تخثره) في انابيب الطرد المركزي المعقمة . - ترك الدم في الانابيب لمدة (40-50) دقيقة ، طرد مركزيا " لفصل المصل الذي ظهر رائقا" فوق خثرة الدم . - ان المصل المفصول خلال هذه الخطوة يمثل المصل التشخيصي لبكتريا الشيكلا (Shigella)

النتائج ان المصلين المحضرين بهذه الطريقة يعطي كل منهما نتيجة موجبة مع المستضد الخاص به والذي هو عبارة عن البكتريا المحقونة بالارانب الخاصة بهذا المستضد اذ ان المصل المحضر من حقن بكتريا Shigella dysenteriae)) أعطى نتيجة موجبة مع المستضد الخاص بهذه البكتريا. والمصل الثاني المحضر من حقن بكتريا (flexneri (Shigellaأعطى نتيجة موجبة مع المستضد الخاص بهذه البكتريا . والنتيجة الموجبة ظهرت خلال دقيقتين بشكل تكتل واضح للعيان (agglutination ) وهذا دليل على وجود البكتريا . اما النتيجة السالبة فلم تظهر اي تكتل وهذا يعني عدم وجود البكتريا . أختبر هذا المصل مع انواع اخرى من البكتريا مثل السالمونيلا والبروسيلا فكانت النتيجة عدم وجود تلازن او تكتل (no agglutination). ان المادة المنتجة عبارة عن مصل له نفس خصائص المصل الاعتيادي عدا انه يحوي اجسام مضادة .

المصادر 1- Schroeder, G.N.,& hilbi,H.(2008).Molecular pathogenesis of Shigella spp.: controlling host cell signaling, invasion, and death by type lll secretion. Clinical Microbiology Reviews, 21(1), 134-156. doi:10. 1128/CMR. 00032-07 2-Zoli M.« Etiologies of acute diarrheal disease in Iran» J . Research in medical science , Vol. 7 , No. 4,PP . 346-352,2002 3-Shapiro, W.Hemolytic Uremic Syndrome.2007.Retrieved March 27.2009, form htpp:// emedicine .medscape/article/779218-overview.