تحضير أقراص فحص الحساسية لمضادات الفطريات

Abstract

الخلاصة إن المضاد الحيوي ((Ketoconazole هو عقار مضاد للفطريات يستخدم في منع وعلاج أنواع العدوى الجلدية والفطرية التي تسببها ((Candida-albicans . إما المضاد الحيوي ( Fluconazole) فهو دواء لمعالجة الفطريات المهبلية من نوع (Candida )عند النساء ولمعالجة فطريات الدم والبلعوم . في هذا البحث حضرت عدة تشخيصية للتعرف على حساسية النماذج المرضية لمضادات الفطريات Ketoconazole) ، (Fluconazole وبيان مدى فعاليتها مختبرياً في قتل الفطريات في الوسط الزرعي : (Mueller Hinton Agar+2% Glucose+0.5mcg/ml Methylene Blue Dye Medium) . CLSIاذ اظهرت فعالية عالية ومطابقة لنتائج العدة الاجنبية وحسب قراءات

الكلمات المفتاحية : المضاد الحيوي، فطريات الدم ، اقراص فحص الحساسية .

المقدمة تتأثر الفطريات بالمضادات الفطرية بدرجات مختلفة منها الحساسة ومنها المقاومة. يتميز (Fluconazole) , (ketoconazole) عقار مضاد للفطريات ذائب في الدهون ((Lipophilic يؤدي استخدامه إلى تراكمه في الأنسجة الدهنية ويتم امتصاص عقار ketoconazols)) كأفضل ما يكون في الأوساط شديدة الحامضية , لذا تعمل مضادات الحموضة (Anti-acid) أو المسببات الأخرى لانخفاض مستوى أحماض المعدة على تقليل درجة امتصاص العقار عند تناوله عن طريق الفم [1] . المضاد الفطري وطريقة عمله : يقوم ((Fluconazole الفطريات عن طريق تداخل مع أغشية الخلايا في الفطريات مما يتسبب في ظهور ثقب في الغشاء الخلوي الفطري فتتسرب محتويات الخلايا الفطرية و تؤدي الى موتها ، وهذا المضاد يعمل على تثبيط الفطريات الجلدية (candida albicans) وانواع من الخميرة في حين يتميز المضاد (Ketoconazole) على تثبيط انزيم Dimethylase-14)-α) [2] . تصنيع الاقراص : 1- يذاب وزن محدد من (fluconazole) بتركيز (25µg) و Ketoconazole) ) بتركيــز (10 µg) في الـ PBS)) . 2- تقطع أوراق ترشيح على شكل اقراص تشبع بقطر mm) 6) من ورق ترشيح مناسب بسمك وصلابة وامتصاصية ملائمة وتعقم لمدة ساعة بدرجة (( 60°C. 3- يتم تشبيع الأقراص بكمية محدودة من محلول المضاد الفطري بحيث يمتص القرص طاقته الاستيعابية من السائل المشبع . 4- تجفف الأقراص في حاضنة مفرغة من الهواء وبضغط مناسب وبدرجة حرارة 35C°)) ولفترة محدودة [4,3] . الفحص والتقييم : فحصت كفاءة أداء الأقراص بالطريقة البايولوجية المسماة الانتشار عبر الاكار باستخدام تقنية (كيربي – بوير) المتفق عليها دوليا" [2] . يتم العمل كما يلي : -1تحضر اطباق من الوسط الزراعي الغذائي الخاص بالفطريات : (Mueller Hinton Agar+2% Glucose+0.5mcg/ml Methylene Blue Dye Medium) -2 تنشيط الفطريات لمناسبة قبل الشروع باجراء عملية الفحص . -3تلقح الاطباق بالفطريات ثم يجفف سطح الوسط لمدة (15min) . -4توضع الاقراص على سطح الطبق ثم تحضن الاطباق في الحاضنة الى اليوم التالي في درجة حرارة (37°C) . -5 يتم قياس اقطار مناطق تثبيط النمو الجرثومي الناتجة بدقة . -6تقارن النتائج مع اقطار التثبيط القياسية والمثبتة دوليا" [4] .

الاستنتاجات و المناقشة عنــد فحص الاقرص المشبعــة بالمضـــاد الفطــري Fluconazole)) علــى العتـــرة القياسيــــــة (ATCC90028)) (Candida albican تكون اقطار مناطق التثبيط ما بين mm (27-36) للفطريات الحساسة للمضاد الفطــــــري ( Fluconazole) , اما العترة القياسية (Candida parasilosis) تكون اقطار مناطق التثبيط لها ما بين (22-32) mm للفطريات الحساسة للمضاد الفطري ((Fluconazole . وقد تم تجربة الاقراص المشبعة بالمضاد الحيوي ((Fluconazole والمحضرة مختبريا" في مركزنا ومقارنتها مع عدة اجنبية لشركة (Himidia ) وكانت النتائج مطابقة . وعنــد فحــــص الاقـراص المشبعـــــــة بالمضـاد الفطـري ) Ketoconazole (علــــــــى العتــــرة القياسيـــــــةATCC 90028)) ) (Candida albicans تكون اقطار مناطق التثبيط ما بين mm (20-32) للفطريات الحساسة للمضاد الفطري) (Ketoconazole , اما العترة القياسية Candida parasilosis(ATCC90028))) تكون اقطارمناطق التثبيط لها ما بين (14-20) mm للفطريات الحساسة للمضاد الفطري) Ketoconazole) .وقد تم تجربة الاقراص المشبعة بالمضاد الحيوي (Ketoconazole) والمحضرة مختبريا على الفطريات القياسية المذكورة سابقا" والمقاومة للـ Ketoconazole)) ومقارنتها مع عدة اجنبية لشركة (Himidia) .تبين ان المضادات الفطرية المصنعة مختبريا" (وحسب كتاب التقييم الصادر من مختبر الصحة العامة المركزي) مطابقة للنتائج الاجنبية حسب ((CLSI . Clinical and Latest Sstander Institute,2013))

References 1-Brown,S. and Traczewski,M. (2007) Quality control limits for posaconazole disk susceptibility tests on muller – HILTON agar with lucose and methylene blue . Clin. microbial .45 (1) : 222-223. 2-Clinical and Latest Stander Institute, CLSI. (2010).Performance standards for Antimicrobial Disk susceptibility test, 30 (1). 3- Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of yeasts; Approved Guidelines (2009). sec Edit 29 ( 17) CLSI document M44 - A2 for mor detail refer to this volume. 4- Zone Diameter Interpretive Standards, Corresponding Minimal Inhibitory Concentration (MIC) Interpretive Breakpoints, and Quality control limits for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of yeast, Third International Supplement CLSI document - M444- s3- 2009.