تحضير عدة فحص انزيم الاوكسديز بطريقة الشرائط والاقراص

Abstract

إن أقراص فحـــص الأوكسديــز هـي عبــــارة عـــن أوراق ترشيـــح معقمـــة ومشبعــــة بمــادة كيمياوية (dimethyl-P-phenylenediamine) خاصة بهذا الفحص و تفحص الأحياء المجهرية وتحدد قابليتها على انتاج هذا الأنزيم ومن ثم تصنيفها الى نوعين إيجابية الأكسدة هي التي تمتلك انزيم الاوكسديز وسلبية الاكسدة هي التي لاتمتلك انزيم الأوكسديز ممايجعل عملية تشخيصها بصورة أدق . ومثال عليها : الأحياء المجهرية التي تصنع هذا الانزيم مثل (Pseudomonass ssp) والتي تعطي تفاعل موجب وايضا" لتميزها عن العائلة المعوية Enterobacteriaceace)) حصرا" والتي تعطي تفاعل سالب . حضرت العدة بشكل شرائط واقراص فحصت عن عزلات قياسية معروفة حساسيتها لهذا الفحص وكانت النتائج مطابقة للعدة الأجنبية .

الكلمات المفتاحية :- اقراص فحـــص الأوكسديــز، البكتريا ايجابية الأكسدة ، البكتريا السالبة الأكسدة .

المقدمة يعرف اختبار الاوكسديز بأنه رد فعل كيمياوي حيوي يستخدم للكشف عن وجود (Cytochrom Oxidase) وهذا الأنزيم (في بعض الاحيان) يسمى (indophenols Oxidase) [6,2,3] وفي حالة البكتريا التي تمتلك أنزيم الأوكسديز يتحول المحلول عديم الى محلول ارجواني مؤكسد [2,4,6] اما البكتريا التي لاتمتلك هذا الانزيم لا يتغير لون المحلول . استخدامات الفحص : يستخدم الفحص في التشخيص البايوكيميائي (Biochimical Test) لتصنيف البكتريا وكما يأتي : 1- البكتريا ايجابية الأكسدة / يعني أن البكتريا تمتلك انزيم الأوكسديز وبالتالي تستخدم الاوكسجين لإنتاج الطاقة مثل : Pseudomonas , Neisseria gonorrboras , Aeromonas. 2- البكتريا السالبة الأكسدة / يعني أن البكتريا تمتلك انزيم الأوكسديز وبالتالي لاتستخدم الأوكسجين لإنتاج الطاقة مثل : Staphylococcus auveus , Escherichia coli . طرق الكشف عن الأنزيم : هناك العديد من الإختلافات في طريقة عمل اختبار الأوكسديزمنها على سبيل الحصر الطرق التالية : 1- اختبار ورقة الترشيح . 2- اختبار بقعة ورقة الترشيح . 3- اللوح المباشر . 4- شرائط الفحص السريع . 5- اقراص فحص الاوكسديز (وهي موضوع البحث)[6,1] .

طريقــة العمــــل 1 - تحضير محلول الفحص : حضرمحلول الفحص باذابة (0.06 g) من مادةN-N Tetramethyl-P-Phenylenediamine dihydrochlride و (0.02 g) من مادة (Ascorbic Acid) في (100 ml) من مادة (Dimethylsulfoxide) رشح فــي ورق الترشيــح (whatman No.1) حفظ المحلول في قناني معقمة ومعتمة في الثلاجــة بدرجة (4 C°) .

2- تحضير شرائط واقراص الفحص : حضرت الشرائط بقياسات cm (6 X 0.5) أما أقراص الفحص فكانت بقطر mm) 6) .

النتائج فحصـت العدة المحضرة في هذا المركز على عزلات قياسية معروفة حساسيتها لهذا الفحص ، وكما مبين في الجدول رقم (1) .

جدول التصنيف :

النتائج Stander Strain Dark purple color ارجواني غامق +ve Pseudomonas aeruginose ATCC 27853 No color change عدم تغيير اللون - ve Escherichia coli ATCC 25922 +ve Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 - ve Staphylococcus aureus ATCC 9144

جدول رقم (1) يبين عمل العدة على عينات قياسية

Refrences 1- Gordon ,J. and mcleod. J.W. 1928. The practical application. of the direct Oxidase reaction in bacteriology .J.pathol. Bacteriol. 31:185-190 . 2- Gaby,W.l.and Free. 1958.Differential diagonosis of pseudomonas-like microoganismsin the clinical laboratory. J.Bacteriol.76:442-444 . 3- Mac Faddin,j.1972. Biochemical tests for the identification of medical bacteria Williams and wilkins company , Baltimore,MD. 4- Gerhardt, Murray P. R.G.E. Costilow R.N, Wood . E-W.A, krieng. N.R,and Phillips .G.B, 1981. Manual and methods for general bacteriology-Asmpress, Washington, DC. 5- Lui, J.-K. and jurtshuk. P.1986.N,N Tetramethyl. P-phenylenediamine-dependent cytochrome oxidase analyses of Bacillus species.Int. J.syst.Bacteriol.36:38-46 . 6- Kovacs,N.1956. Identification of Pseudomonas pyocyanea by the oxidase reaction .nature 178:703-707 .