-20تحضير عدة الكشف عن تلوث المياه ببكتريا ضمات الكوليرا

Abstract

تضمن البحث طريقة تحضير عدة تشخيصية تستخدم حقلياً للكشف عن تلوث المياه ببكتريا ضمات الكوليراVibrio) Cholera ) . تعتمد طريقة الفحص على تحضير وسط زرعي انتقائي خاص بالبكتريا مع كاشف لوني يتغير عند حدوث زيادة في حامضية الوسط الزرعي نتيجة الفعاليات الحيوية للبكتريا . تمتاز طريقة العمل بسهولة اجرائها و توفر المواد الاولية اضافة الى ان العدة المحضرة تمتاز برخص ثمنها و سهولة اجرائها و عدم الحاجة الى مختبرات متخصصة لذا يمكن استخدامها في المسوحات الخاصة بفحوصات المياه .

الكلمات المفتاحية : بكتريا ضمات الكوليرا ، تلوث المياه . المقدمة الكوليرا هي مرض معوي تسببه بكتريا ضمات الكوليرا ( Vibrio Cholera) التي تنتقل عن طريق مياه الشرب الملوثة . يتميز المرض بظهور أعراض الاسهال الحاد والغثيان ، القيء، الجفاف نتيجة فقدان السوائل و الذي يسبب الخمــول و الهـزال و جفاف الجلد و العطـش المستمـر ] 1 . [ تعتبر المياه الملوثة بالبكتريا هي المصدر الرئيس لعدوى الكوليرا . تتميز البكتريا بانتاجها للذيفان المعوي المسؤول عن ظهورأعراض الاسهال اذ يعمل الذيفان enteric toxin) ) على تحفيز بطانة الامعاء الدقيقة لافراز كميات من السوائل تعطي للبراز مظهر مائي شبيه بماء الرز . بكتريا الكوليرا لا تقاوم درجات الحرارة العالية و لا الحموضة و لكنها تـقـاوم الانجماد و لمدة (48 h)] 2 [ يكشف عن تلوث المياه ببكتريا الكوليرا مختبريا بنقل نماذج المياه الى المختبر تزرع على اوساط زرعية خاصة بنمو البكتريا وتوضع في الحاضنة بدرجة ( 37 Cº) لمدة (48 h) يشاهد نمو مستعمرات البكتريا في حالة تلوث المياه تفحص بعدها الكيموحيوية ((biochemical test لتثبيت نوع البكتريا وتلوث المياه .

المواد و طرائق العمل - المواد : ت المادة الكمية 1 Sodium Chloride 1 g 2 Indicator 0.08 g 3 Bromothymol blue 4 Sodium Citrate 1 g 5 Peptone - special 1.2 g 6 Sucrose 2 g 7 Sodium thiosulphate 0.65 g 8 OX gall 0.6 g 9 Empty Capsuls 60

حضر الوسط بالاوزان المذكورة آنفا بوضع الخليط في كبسولات فارغة بأوزان متساوية . وضعت كل كبسولتين في واستخدمت (30) عبوة زجاجية للتجربة وحفظت في الثلاجة للاستخدام . (25 mm)عبوة زجاجية شفافة معقمة حجم

- طريقة العمل أستخدم ثلاثون نموذج مياه في التجربة (20 mm per Sample) . أخذ منها خمسة و عشرون نموذج ، أضيف لها بكتريا الكوليرا ((Vibrio Cholera و أستخدمت خمسة نماذج لمياه معقمة كنماذج سيطرة إذ ملئت العبوات الزجاجية (20 ml) من الماء وأحكم غلقها ، قورنت نتائج العدة المحضرة مع العدة الجاهزة وهي (( HiMedia الهندية وحسب الجدول رقم (1) . وضعت جميعاً في حاضنه بدرجة Cº(35-37) لمدة ( 24 h) . فحصت النماذج لملاحظة التغيرات في لون الوسط ثم تركت هذه النماذج لمدة ( h24) اخرى لغرض تأكيد النتائج .

النتائج و المناقشة اظهرت النتائج الموجبة (الملقحة بالبكتريا) تلون نماذج المياه بلون اصفر محمر) (red yellow فيما اظهرت النماذج السالبة لون ازرق غامق . و ثبتت النتائج كما في الجدول رقم (1) و الصورة المرفقة . تقوم بكتريا الكوليرا باستخدام مكونات الوسط و هو قاعدي (pH=8.2) لتنمو و تتكاثر و يؤدي ذلك الى تخمرالسكروز الموجود في الوسط مما يحوله الى وسط حامضي يؤدي الى تحول لون الكاشف من الازرق الغامق الى تدريجات لونية من الاصفر الى الاحمر (Frances, 2009). ان وجود جميع ما تحتاجه البكتريا للنمو في هذا الوسط يؤدي الى تكاثرها بشكل سريع حيث تعتبر مادة البيبتون مصدر للنيتروجين و الكاربون و الفيتامينات . و مواد (Sod.Citrate) و Ox gall) ) و مثبط للانواع الاخرى من البكتريا . و يعتبر (Thiosulphate) مصدر للكبريت و جميع هذه المواد تعطي وسط قاعدي (pH= 8.2) وهو مهم لنمو البكتريا . لذلك استغلت هذه المواصفات الخاصة بالبكتريا بتحضير هذا الكشف [4] .

جدول رقم (1) يوضح عدد النماذج الموجبة والسالبة التي فحصت باستخدام العدة المنتجة من قبل شركة (Hi Media) الهندية و العدة المحضرة في مركز الرازي .

Hi Media Water test Razi Water test Results Results Total -ve samples +ve samples Total -ve samples +ve samples 30 5 25 30 5 25

العينة موجبة (+) العينة السالبة (-) صورة رقم (1) توضح تلون العينة الموجبة بلون اصفر محمر والعينة السالبة بلون ازرق غامق

المصادر 1- Ryan KJ, Ray CG (editors ) (2004) . Sherris Medical Microbiology. McGraw Hill . 2- Azman As, Rudolph KE, Cummigs DA, Lessler J(November 2012) The incubation period of cholera. Jornal of infection 66 (5): 432-438 . 3- Frances FL, Masrshal BD. (2009). (A Manual of laboratory) and diagnostic tests (8th ed). Lippincott Williams & Wilkins . 4- Ktsuaki H, Shinji Y. (2006). (Immunology & Medical Microbiology) (Development and evaluation of multiplex PCR assay of rapid detection of toxigenic vibrio cholera (Bluckwell publishing Ltd.)