| الملخص | الخلاصة
القريص ) Urtica dioica ( من مجموعة الاعشاب الطبية ذو الاستخدامات العديدة , حضر مستخلص نبات القريص بهدف دراسة تاثيره على عملية ايقاف نزيف الدم بمختلف مسبباته المرضية او العارضة , جمع النبات في مرحلة قبل التزهير من منطقة الجادرية وحضر نموذج منه بطريقة الاستخلاص الكحولي لجميع اجزاء النبات وشخصت المواد والمجاميع الفعالة باستخدام الكشوفات الكيميائية واظهرت النتائج وجود مادة الفايتول (Phytol) الضرورية في عملية تخثر الدم اضافة الى الكلايكوسيدات ,التانينات ,البروتينات ,الفلافونيدات وغيرها. كما تم استخدام كروماتوكرافيا الغاز حيث وجدت المواد المضادة للاكسدة والمضادة للالتهابات والمضادة للسرطان اضافة الى ذلك استخدمت طريقة كروماتوكرافيا السائل عالي الاداء اذ شخصت مادة المورين (Morin) ذات الاهمية في تصنيع عدد من الفيتامينات. اظهر فحص العناصر النزرة وجود تركيز عالي من الصوديوم والحديد وتركيز واطىء من الزنك, اجتاز النموذج المحضر فحص السمية الذي اجري على الحيوانات المختبرية (الفئران) واثبت عدم سميته بالجرعات المستخدمة, ووجد من نتائج اختبار معالجة نزف الدم على الفئران ان للمستخلص النباتي تأثير على تقليص مدة ايقاف النزف لتصل الى (1.14 ثانية( قياسا بالمجموعة غير المعاملة (3.21) اي اقل بحوالي 60%, اختبر النموذج المحضر على مجموعة من الارانب بجرع فموية اذ وجد بعد اسبوعين ان كمية هيموكلوبين الدم انخفضت وبمستوى معنوي (P<0.01) الى )13.2( مقارنة مع السيطرة (14.5( وانخفض حجم الخلايا المضغوط وبقيمة معنوية بمستوى (P<0.02) الى (41( مقارنة مع السيطرة ((46 كما لوحظ ان عدد كريات الم البيض انخفض وبقيمة معنوية بمستوى (P<0.01) 5900 مقارنة مع السيطرة )8200) ووجد انخفاضا وبمستوى معنوي P<0.01)) في زمن النزف بنسبة (50%) بعد المعاملة بالمستخلص كما عمل على تقليل زمن التخثر بنسبة الثلث وبقيمة معنوية P<0.01)) .
الكلمات المفتاحية : القريص , النيتل , نزف الدم ، الفايتول ، المورين .
المقدمة
القريص من مجموعة الاعشاب الطبية المعروفة تجاريا بمختلف انحاء العالم وله استخدامات عديدة جدا منها كموقف للنزيف الداخلي او الخارجي ((Internal /external bleeding وبسبب احتواء نبات القريص خصوصا في الاوراق على كمية عالية من فيتامين (K) (المعروف دوره في عملية تخثر الدم ) استخدم مطحون اوراق القريص في السعوط snuff)) لايقاف نزف الانف (hose bleeds) ومختلف انواع الجروح واثناء العمليات الجراحية للسيطرة على ايقاف النزف الدمي ولمعالجة النزف الشديد اثناء الحمل, ان لنبات القريص استِخدام رئيسي ومهم بالاشتراك مع بعض النباتات الاخرى مثل الزعتر وعرق السوس وكرم العنب والتي تعرف على المستوى التجاري بأسم Ankaferd blood stopper (ABS) الذي يلعب دورا مهما في تخثر الدم haemostatic agent)) حيث ان للقريص وبقية النباتات المذكورة له تأثير على الخلايا الطلائية , خلايا الدم , توالد الاوعية الدموية angiogenesis)) , التضاعف الخلوي (cellular proliferation) , ديناميكية الاوعية (dynamics) بالاضافة الى تنشيط الاشارات ما بين الخلايا cell mediators)) . وما تزال الدراسات والبحوث جارية لمعرفة الميكانيكية الرئيسية في عمل هذا المنتج كمادة مخثرة للدم التي لم تعرف لحد الان على وجه الدقة [1]. ومن هذا المنطلق جاءت هذه الدراسة بهدف الوصول الى تحضير مستخلص من نبات القريص ووصفه ومعرفة مركباته الاساسية التي لهل تاثير على عملية ايقاف النزف بمختلف انواعه وعلى عملية تخثر الدم باستخدام الحيوانات المختبرية.
الجزء العملي
جمع النبات في شهر نيسان / 2015 وخلال مرحلة قبل التزهير من منطقة حدائق مجمع وزارة العلوم والتكنولوجية وتم تصنيف النبات في جامعة بغداد / كلية العلوم بعدها جفف النبات بدرجة حرارة الغرفة لمدة أسبوعين ثم طحنت محتويات النبات (جذور وأوراق وسيقان) بوساطة الهاون الخزفي إلى أن أصبح بشكل مسحوق ناعم واستخلص بطريقة الاستخلاص الكجولي وملخص الطريقة :مزج مسحوق النبات المحضر مع كحول الميثانول بنسبة (10:1 (ثم حضنت في الحاضنة الهزازة وبسرعة ( 150 دورة / دقيقة( وبدرجة حرارة الغرفة ولمدة (ساعة واحدة) . بعدها استخدم جهاز الطرد المركزي المبرد لترشيح النموذج بسرعة (4000 دورة / دقيقة ) . وجمع الراشح بعدها تم ترشيحه مرة أخرى باستخدام ورق الترشيح نوع واتمان رقم (1), ركز الراشح باستخدام جهاز المبخر الدوارثم جفف وطحن باستخدام الهاون الخزفي الى ان يصبح بشكل مسحوق ناعم .
الفحوصات الكيميائية : لغرض التعرف على المجاميع الرئيسية الكيميائية الفعالة الموجودة في نبات القريص أجريت اختبارات الكشف عن البروتينات ، التانينات , الكلابكوسيدات , الفينولات , الفلافونيدات,الصابونين , القلويدات والراتنجات.
كروماتوكرافيا الغاز: معظم المكونات المهمة للنموذجين المحضرين تم تشخيصها باستخدام جهاز كروماتوكرافيا الترحيل بالغاز (GC) , باستخدام Agilent 5977 MSD system )) نوع العمود Hp5 ms ultra intet (30*0.25µm ID*0.25 µm df ) ومعدل جريان (1.2784 مل/ دقيقة) بضغط ( 11.2) psi.
كروماتوكرافيا السائل عالي الداء HPLC)) : تم إجراء الاختبار وفق طريقة (Nicolas) وجماعته عام 2005)) [2] استخدم ضمن هذا النظام الطور الراجع (العكسي) (reverse phase C-18) ومواصفات العمود (50*4.6 mm ID) , حجم الجسيمات (3 مايكرومتر) , وكان الطور المتحرك (0.1 %) حامض الخليك- ميثانول (40 : 60 حجم/ حجم) , معدل الجريان (1.2 مليلتر / دقيقة) . واستخدم (UV Detector) بطول موجي (275 نانومتر) .
تحديد مستوى العناصر النزرة: قيس مستوى العناصر بجهاز((Atomic Absorption Spectrophotometer
اختبار السمية : تم اجراء اختبار السمية وفق (OECD Guidelines for the testing of chemicals) (2000) ]3[ . وفي مركز الرازي للبحوث وانتاج العدد التشخيصية الطبية / قسم دار ايواء ورعاية الحيوان . حيث استخدمت الفئران البيض من نوع البينو) (Albino لهذا الغرض .
اختبار معالجة نزف الدم في الفئران : قسمت الفئران إلى مجموعتين : الأولى تتكون من ثلاثة فئران كمجموعة سيطرة , عمل على إحداث نزف في منطقة الذيل عن طريق قطعه بوساطة المقص وعلى بعد (3 سم( من نهاية الذيل وترك بدون معاملة الى أن يتوقف النزف وسجل الزمن اللازم لذلك, أما المجموعة الثانية فتتكون أيضا من ثلاثة فئران بنفس المواصفات للمجموعة الأولى وبنفس عمل الخطوات السابقة لمجموعة السيطرة عدا استخدام النموذج المحضر من مستخلص القريص حيث تم إذابة (0.5 ملغم( في (1 مل ) ماء مقطر وتتم المعالجة باستخدام غمس القطن في المستخلص المحضر جيدا ثم وضعه على منطقة ذيل الفار التي تم قطعها إلى أن يتم توقف النزيف وسجل الزمن اللازم لذلك.
اختبارات الدم في الأرانب : باستخدام مجموعتين من الأرانب نوع نيوزيلندي ابيض كل مجموعة ثلاثة أرانب تراوح أوزانها من (1-2) كغم وبعمر من سنة إلى سنتين , المجموعة الأولى : مزج النموذج المحضر الجاف (مطحون) مع الغذاء بواقع (5 غم / كيلو( من وزن الجسم يوميا ولمدة (أسبوعين) أما المجموعة الثانية فتترك بدون معاملة (عامل سيطرة ) , حددت الاختبارات المعروفة للدم (Hematological Test) .
المناقشة و الاستنتاج
اختيرت طريقة الاستخلاص الكحولي لأنها الأفضل في إستخراج العديد من المواد الفعالة كما ان الاستخلاص الحار قد يؤدي الى فقدان فعالية بعض المواد التي تتأثر بالحرارة كالبروتينات والمعادن مثل الكالسيوم والمغنسيوم والفيتامينات ( خصوصا فيتامين K ) ذو الأهمية في عملية تخثر الدم , بينت نتائج الفحوصات الكيميائية للمستخلص الكحولي لنبات القريص وجود ( الكلايكوسيدات , التانينات, البروتينات, الفلافونيدات ومختلف المركبات الفينولية , القلويدات. السابونين) , بينما خلت من الراتنجات (resins) والستيرويدات , أظهرت نتائج تحليل كروماتوكرافيا الغاز للمستخلص الكحولي لنبات القريص العديد من المركبات الكيميائية ذات الأهمية الطبية والعلاجية مثل المركبات المضادة للأكسدة ((Antioxidant , المواد المضادة للالتهابات
(Anti-inflammatory) , المواد المضادة للسرطان (Anti-carcinogenic) بالإضافة الى المواد المضادة للشيخوخة Anti-aging, المركبات الفينولية وغيرها, أما نتيجة الفحص بجهاز كروماتوكرافيا الغاز اظهرت وجود العديد من المواد الكيميائية المختلفة ومن بين المواد الكيميائية المهمة وجود مركب الفايتول (Phytol) والذي يمكن ان يلعب دور مهم كسوابق (Precursor) لتصنيع فيتامين (E) وفيتامين ((K1 الضروري في عملية تخثر الدم . يوضح الشكل (1) كروماتوكرافيا السائل عالي الأداء HPLC لمادة المورين (morin) القياسي ونموذج مستخلص نبات القريص , شخصت مادة المورين في المستخلص المحضر طبقا لزمن الاسترجاع (retention time) الذي تم الحصول عليه من النموذج القياسي تحت الظروف المماثلة حيث حدد انتشار قمة تتماثل مع القيمة الواقعة بين مادة المورين في زمن الاسترجاع )2.5 و 2.7 ( دقيقة . والمورين يعتبر من المواد التي تعود الى تحت صنف الفلافونية (flavonol) المهمة التي تدخل في عملية تصنيع عدد من الفيتامينات ويلعب دور مهم في الحماية من المواد الكيميائية (chemoprevention) , علاج السرطان , حماية نظام المواد المضادة للأكسدة .اما تركيز العناصر النزرة في أوراق نبات القريص فقد وجد تركيز عالي من الصوديوم والحديد وتركيز واطيء من الزنك ولا وجود لعنصري الرصاص والنحاس , اثبت اختبار السمية الذي اجري على الحيوانات المختبرية (الفئران) عدم تسجيل اي اعراض غير طبيعية على الحيوانات بعد تجريعها بالمستخلص المحضر من نبات القريص بالتراكيز الثلاثة خلال الساعات الاربع الاولى من الاختبار ولم تسجل هلاكات بعد مرور (24 ساعة( من الاختبار وهذا يثبت ان المستخلص النباتي الكحولي المحضر غير سام وآمن للتراكيز المستخدمة في التجربة . أما اختبار معالجة نزف الدم في الفئران فقد وجد إن للمستخلص النباتي المحضر تأثير على عملية إيقاف نزف الدم في الفئران بمدة اقل من تلك المجموعة غير المعاملة إذ إن معدل زمن توقف جريان الدم وتخثره في المجموعة الأولى استغرق (1.14 ثانية( بينما استغرق (3.21) في مجموعة السيطرة اي اقل بحوالي )60 % (. اما بالنسبة الى نتائج اختبارات الدم التي اجريت على الارانب جدول (1) فقد وجد إن قيمة الهيموكلوبين انخفضت وبقيمة معنوية على مستوى (P<0.01) بعد مدة )أسبوعين( من المعاملة بالمستخلص النباتي إلى )13.2) بالمقارنة مع السيطرة غير المعاملة (14.5). أما مستوى حجم الخلايا المضغوط فقد انخفض وبقيمة معنوية على مستوى (P<0.02) بعد المعاملة إلى ((41 بالمقارنة مع السيطرة كذلك لوحظ أن عدد خلايا الدم البيض قد انخفض وبقيمة معنوية على مستوى (P<0.01) بالمقارنة مع السيطرة , كذلك فان المستخلص عمل على تقليل زمن التخثر بنسبة الثلث تقريبا وبمستوى معنوية (P<0.01) , وهذا يعود ربما الى الاختلاف في طريقة التغذية التي استخدمها الباحثين للأرانب حيث استخدما الأوراق الطرية في المرحلة الأولى والأوراق الجافة في المرحلة الثانية وقد علل الباحثين الزيادة في الزمن الى وجود مادة الدايكومارول ((Dicoumarol والذي يتداخل مع القناة الهضمية للارانب مع وظيفة فيتامين K , بينما في هذه الدراسة تم استخدام المستخلص الكحولي في تغذية الارانب ولم تظهر هذه المادة وبالتالي ادى فيتامين K وظيفته بدون اي تداخل وعمل على خفض زمن النزف وزمن التخثر. ان لمستخلص نبات القريص القدرة على تحفيز تكون شبكة مغلفة و معقدة من البروتينات (encapsulated complex protein) مع كريات الدم الحمر الحية مما يؤدي الى تجمعها والتصاقها (Agglutination) وعمل غطاء يغلق الأوعية الدمية , وتعتمد تحفيز هذه الشبكة من البروتينات المعقدة بالاساس على التفاعل بين المستخلص المحضر وبين بروتينات الدم خصوصا الفايبرينوجين- ﮔاما , ويحدث هذا التجمع والالتصاق من خلال الارتباط مع مستقبلات السبكترين (Spectrin) والانكرين (Ankryin) الموجودة على اغشية الكريات الحمر. يمكن الاستنتاج ان المستخلص الكحولي لنبات القريص غير سام واكثر امنا عند استخدامه كعلاج من الاوراق الطرية او الجافة التي تستخدم بدون اجراء اي معاملة عليها ويمكن استخدام نبات القريص (المستخلص الكحولي) كمادة موقفة للنزيف والمساعدة على تقليل مدة زمن التخثر.
جدول رقم (1) اختبارات الدم الهيموكلوبين , حجم الخلايا المضغوط , كريات الدم البيض , زمن النزف وزمن التخثر بعد المعاملة بالمستخلص النباتي .
نوع الاختبار النموذج الاسبوع الاول الاسبوع الثاني
(P) value
نسبة الهيموغلوبين Hb))
g / dl المعاملة 14.6
13.2
0.01 %
السيطرة 14.5
14.6
حجم الخلايا المضغوط (PCV) % المعاملة 46
41
0.02 %
السيطرة 46
46
Total W.B.C
µl/ x103 المعاملة 8.400
5.900
0.01 %
السيطرة 8.400
8.200
زمن النزف Bleeding Time (min) المعاملة
3.2 1.9
0.01 %
السيطرة
3.5 2.1
زمن التخثرClotting Time (min) المعاملة
6.2 4.3
0.01 %
السيطرة 6.2 6.6
شكل (1) HPLC (A) المورين القياسي (B) نموذج مستخلص اوراق القريص
المصادر
-1Barka, E. Gognies, S., Nowak, J., et al (2002). Inhibitory effect of endophyte bacteria on Botrytis cinerea and its influence to promote the grapevine growth. Biol. Control 24, p. 135-142.
-2Nicolas, R.; P. Morris and K. Judith. ( 2005). Phenolic Compounds: Extraction and Analysis. Lotus japonicus Handbook, Chap. 7: 349-355.
-3OECD (2000) Guidance Document on Acute Oral Toxicity. Enviromental Helth and Safety Monograph Series on Testing and Assessment No 24.
-4Nicolas, R.; P. Morris and K. Judith. ( 2005). Phenolic Compounds: Extraction and Analysis. Lotus japonicus Handbook, Chap. 7: 349-355. | en_US |
