تحضير عدة للكشف النوعي عن مستوى D-dimer في الدم بطريقة الاليزا

Abstract

في هذا البحث تم تحضير عدة تشخيصية تستخدم مختبريا للكشف عن عامل تخثر الدم الداي دايمرD-dimer كوسيلة تشخيصية لتجنب الاصابة بجلطة دموية بطريقة التفاعل المناعي الانزيمي (ايلايزا). يعتمد الفحص على وجود اضداد خاصة بالدي دايمر في عينة الدم للشخص المراد فحصه والتي تكون مضاد مناعي مع المستضد المطبع على صفيحة معايرة يكشف عنه باستخدام المقترن المتكون من اضداد ثانوية معلمة بانزيم HRP والذي يعطي اشارة لونية مع المادةا الاساس (substrate substance) المضافة اليه تعتمد شدتها على كمية الاضداد الموجودة في العينة المرضية. يعد دي دايمر (D-dimer) قطعة من البروتين الذي يتم إنتاجه عندما يحدث تكسير لخيوط الفايبرين في الدم، وهي عملية تُعرف بالتحلل الفيبري. تُستخدم اختبارات دي دايمر للكشف عن وجود خثرات دموية في الجسم، حيث يرتفع مستوى دي دايمر في الدم عندما يكون هناك نشاط زائد لتخثر الدم. استخدمنا صفيحة معايرة مطبعة بمستضد الدي دايمر ومقترن منتجة من شركة أجنبية invitrogen بينما تم تحضير بقية مكونات العدة من كواشف وبفرات لتكون صالحة للاستخدام المختبري. اجريت الاختبارات على العدة المحضرة لـ (80) نموذج منها (40) نموذج لحالات سالبة لأشخاص اصحاء و (40) نموذج لحالات موجبة حيث تم الحصول على جميع نماذج الدم من مختبر الصحة المركزي والمختبرات الاهلية وقد اظهرت الاختبارات تطابق في نتائج القراءات في حالة استخدام العدة المحضرة مقارنة مع عدة اجنبية استخدمت لهذا الغرض وباستخدام جهازي الغسل والقراءة المتوفر في مختبرات المركز لغرض اجراء السيطرة النوعية على كفاءة العدة المحضرة ويتم الاعتماد على قيمة معدل الكثافة الضوئية Optic Density) OD) لنماذج السيطرة السالبة والتي يجب ان تكون اقل من 0.4 باستخدام الطول الموجي 450 نانوميتر حيث قيست النماذج المحضرة باستخدام جهاز ELISA Reader وكان المعدل 0.263 OD مقارنة بالنماذج السالبة للعدة الاجنبية والتي كانت OD 0.258