تحضير عدة الكشف عن البكتريا السالبة لصبغة غرام بطريقة الكيمياء الكهروستاتيكية باستخدام مركب اميني

Abstract

تم تحضير عدة تشخيصية للكشف عن البكتريا السالبة لصبغة غرام حيث تم اختيار البكتريا المعوية Escherichia.coli.157 من الاجناس شديدة الخطورة حيث تصيب الجهاز الهضمي وتسبب مرض الاسهال الدموي والذي غالبا ما يؤدي الى الموت اضافتا الى تسببها بانواع من السرطانات الجهاز الهضمي كنموذج لباقي انواع البكتريا السالبة لصبغة غرام . مبدأ عمل هذه العدة التشخيصية يعتمد على مبدا الكيمياء الكهروستاتيكية الذي يعتمد على التجاذب بين الشحنات وتغير لون الوسط الذي يتم فية فحص و تشخيص البكتريا ذات الشحنة السالبة نتيجة وجود مركب Lipopoly saccharide . الكاشف اللوني المستخدم في تحضير العدة هو الميركا بتوم اثيل امين المرتبط بدقائق الذهب النانويةMercaptoethyl amine – madifie gold – nanoparticles (MEA-AUNPS) الذي يحمل الشحنة الموجبة نتيجة لوجود مجموعة الامين الطرفية. تم تحضير عدة تراكيز من عالق البكتيريا ال E.coli . ثم يضاف لها ml 0.4 من( MEA-AUNPS ) المذاب ب 0.6 ml من ال (acetate buffer solution 0.01 M)بحيث يصبح الحجم الكلي (1.O ml) يكون المحلول بلون احمر نتيجة وجود الذهب النانوي. ثم يضاف العالق البكتريا بتراكيز مختلفة لكل نموذج محضر من الخليط اعلاه ثم تقرأ النتائج بعد خمس دقائق حيث يلاحظ تغير لون الكاشف من اللون الاحمر الى اللون الازرق نتيجة لتغير معامل الانكسار الضوئي لدقائق الذهب النانوي نتيجة لتراكمها على الجدار الخلوي . الشحنة السالبة لبكتريا ال E.coli ناتجة من وجود الببتيدات المختلفة وكذلك وجود ال Lipopoly) (saccharide في غشاء البكتريا الخارجي وتزداد الشحنة من خلال تواجد البكتريا في الوسط الحامضي .