تحضير عدة الترحيل الكهربائي للبروتينات

Abstract

الفصل الكهربائي للبروتين هو تقنية مختبرية قياسية يتم من خلالها نقل جزيئات البروتين المشحونة عبر مذيب (وسط ناقل) بواسطة مجال كهربائي. يمكن فصل كل من البروتينات والأحماض النووية عن طريق الفصل الكهربائي، وهو أداة تحليلية بسيطة وسريعة وحساسة. تحمل معظم الجزيئات البيولوجية شحنة صافية عند أي درجة حموضة بخلاف نقطة التساوي الكهربائي الخاصة بها وسوف تهاجر بمعدل يتناسب مع كثافة شحنتها. تعتمد حركة الجزيء عبر المجال الكهربائي على شدة المجال ،الشحنة الصافية على الجزيء، حجم الجزيء وشكله، القوة الأيونية وخصائص المصفوفة التي يهاجر الجزيء من خلالها . ]بولي أكريلاميد وأغاروز هما مصفوفتان داعمتان تستخدمان بشكل شائع في الترحيل الكهربائي بمثابة وسائط مسامية وتتصرف مثل المنخل الجزيئي. يحتوي Agarose على حجم مسام كبير ومناسب لفصل الأحماض النووية ومجمعات البروتين الكبيرة بينما يحتوي البولي أكريلاميد على حجم مسام أصغر وهو مثالي لفصل غالبية البروتينات [. حضرت عدة مختبرية تشمل المحاليل والمواد اللازمة لعملية الترحيل الكهربائي للبروتين واختبرت العينات بدرجات حرارة مختلفة (60°م ،90°م و 100 °م ) عند تحميلها على الهلام وكانت الدرجة المثلى 90°م ، وحيث ان تحضير هذه المحاليل والمواد لانها تحتاج الى وقت طويل وخبرة ومعايرة لضبط الرقم الهيدروجيني والمولارية اضافة الى الانواع المختلفة من البروتينات المراد الكشف عنها وفحصها ومقارنتها بالبروتينات القياسية.