استخلاص وتنقية انزيم البروتيز من بكتريا الزائفة الزنجارية لاستخدامه في استخلاص وتنقية الـ(DNA) من مصادر مختلفة

Abstract

تعتبر انزيمات البروتيز في مقدمة الانزيمات المهمة وفي موقع الصدارة بين الانزيمات التجارية وتستخدم في مجالات صناعية وطبية وغذائية متعددة ، وقد توجه الاهتمام الى انزيمات البروتيز المنتجة من الاحياء المجهرية كبدائل للانزيمات الحيوانية والنباتية نظرا لسهولة تنمية هذه الاحياء والتعامل معها ، حيث يكاد لا يخلو كائن مجهري من انزيمات البروتيز وتقسم حسب موقعها من الخلية الى انزيمات داخلية وانزيمات خارجية. تنتج الانزيمات الخارجية عادة بكميات اكبر من الانزيمات الداخلية كما انها اسهل بالاستخلاص والتنقية. زرعت البكتريا في اوساط تخمر صلبة وسائلة احتوت بعض الاملاح بالاضافة الى مواد نتروجينية مختلفة ، ومن خلال دراسة ومعايرة الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتيز من بكتريا (P. aeruginosa) من حيث درجة الحرارة والرقم الهيدروجيني (PH) بينت النتائج ان اعلى فعالية نوعية كانت عند الوسط السائل الحاوي على خلاصة الخميرة مصدرا للنتروجين عند درجة الحرارة (40 °C) والرقم الهيدروجيني (8) لمدة يومين وبلغت (3.3 unit/mg) بروتين. نقي البروتيز من العزلة رقم (4) (P. aeruginosa) بعدة خطوات تضمنت الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع (70 %) ثم التخلص من الملح بعمليه الفرز الغشائي والمبادل الايوني (Sephadax G200) واخيرا (DEA Cellulose).